Aglutinasi, Flokulasi, Presipitasi [PDF]

Citation preview

PRESIPITASI, AGLUTINASI FLOKULASI HERLISA ANGGRAINI



presipitasi Suatu reaksi yang menghasilkan pembentukan lattice (presipitat/ agregat) Lattice terbentuk apabila antara antigen dan antibody yang bereaksi dalam proporsi yang optimal, kelebihan jumlah salah satu kompleks maka lattice tidak terbentuk



Kuantitas presipitat dapat diukur dengan berbagai metode 



Metode tebaran cahaya (light scattering)







Teknik imunodifusi pasif







Teknik elektroforesis



Light scattering







Berdasarkan peralatan yang digunakan, metode tebaran cahaya dibagi menjadi : Turbidimetri



: Nefelometri



Turbidimetri 



Adalah cara pengukuran suatu kekeruhan (turbidimetri/ cloudiness) di dalam larutan. Kompleks antigen-antibody dalam bentuk presipitat/ endapan dapat menimbulkan kekeruhan







Larutan : partikel padat dalam air (suspense) atau partikel koloid dalam air (koloidal)







Kedua partikel bila kena cahaya dapat mengabsorbsi atau menebar (scatteres) cahaya tsb







Apabila cahaya dilewatkan melalui suatu larutan yg memiliki kekeruhan, maka intensitas cahaya tsb akan berkurang krn refleksi, abosorbsi atau tebaran (scatter)



……………………………turbidimetri 



Absorbsi cahaya oleh kekeruhan dapat dideteksi menggunakan alat turbidimeter atau spektrofotometer







Oleh spektrofotometer dinyatakan dalam unit absorbance







Besarnya absorben sebanding dengan banyaknya presipitat (kompleks antigen-antibody yang terbentuk)



Nefelometri







Pengukuran berdasarkan cahaya dipantulkan pada suatu sudut tertentu



yg







Alat yg digunakan dinamakan nefelometer



ditebar



atau



Perbedaan Turbidimetri dan nefelometri 



Turbidimetri yg diukur cahaya yang diteruskan (ditransmisikan) = mengukur cahaya yang diabsorbsi







Nefelometri yang diukur cahaya yang dipantulkan pada sudut pantul tertentu (70º)







Aplikasi nefelometri ; untuk pengukuran secara kuantitatif immunoglobulin ; IgG, IgM, Ig A dan IgE termasuk pengukuran rantai ringan antibody kappa dan lambda







Juga utk pengukuran CRP, komponen dan beberapa faktor pembekuan darah



Teknik imunodifusi pasif







Menggunakan medium berupa agar







Prinsip kerja ; antigen dan antibody akan berdifusi di dalam lapisan agar, setelah terbentuk presipitat akan terlihat secara visual berupa pita presipitin







Reaksi imunodifusi diklasifkasikan berdasarkan arah dari difusi antara antigen dan antibody



Imunodifusi radial (radial immunodiffusion = RID) 



Metode end poin (Mancini)







Antibodi didistribusikan ke dalam gel agar







Pada panel gel agar dibuat lubang sumuran untuk menempatkan antigen







Antigen akan berdifusi dan bereaksi dengan antibody dalam agar membentuk presipitat yang terlihat secara visual di sekitar sumuran setelah diinkubasi 24-48 jam



Ouchterlony immunodiffusion 



Agar gel immunodiffusion atau passive double immunodiffusion







antigen dan antibody dimasukkan dalam sumuran berbeda dan akan berdifusi secara independent, bertemu dan membentuk presipitat setelah inkubasi selama 12-24 jam



Teknik elektroforesis 



Immunoelektroforesis = gamma globulin electrophoresis = immunoglobulin electrophoresis







Salah satu metode untuk menentukan level dari IgG, IgM atau IgA







= teknik double diffusion ; terapi difusi antigen-antibody dipercepat dengan bantuan arus listrik



aglutinasi 



Reaksi antara antigen yang tidak larut denagn antibody yang larut Atau







Antigen yang bereaksi adalah antigen larut, tetapi diikat oleh suatu pembawa (carrier) yang tidak larut. misalnya ; sel darah merah, butiran latex



Tipe tes aglutinasi 



Aglutinasi langsung (direct agglutination)







Aglutinasi pasif (passive agglutination)







Aglutinasi pasif terbalik (reserve passive agglutination)







Hambatan aglutinasi (agglutination inhibition)







Ko-aglutinasi (co-agglutination)



Aglutinasi langsung 



Antigen yang digunakan adalah antigen yang dalam bentuk aslinya berupa partikel, misal : suspense bakteri







Contoh ; tes widal →Antigen adalah suspensi dari bakteri Salmonella yang telah dimatikan







Titer aglutinasi = pengenceran tertinggi dari serum pasien yang masih memberikan reaksi aglutinasi (+)







Jika reaksi aglutinasi melibatkan sel darah merah, dinamakan hemaglutinasi Contoh : penentuan gol darah







Kit hemaglutinasi untuk mendeteksi antibody anti-virus misal ; hepa A. hepa B, hepa C



Aglutinasi pasif = aglutinasi indirek 



Antigen dilekatkan pada suatu pembawa (carrier) berupa partikel (partikel inert),







seperti : latex, gelatin, silikat …agar hasil reaksi dapat terlihat dengan mata







Aglutinasi pasif ; Pemeriksaan RF, ANA tes, ASTO, antibody terhadap virus ; CMV, rubella, varicella-zozter, HIV-1 dan HIV-2



Aglutinasi pasif terbalik 



Antibodi “carrier”



dilekatkan



pada



partikel







Banyak digunakan untuk mendeteksi adanya antigen dalam serum, urin maupun fluid







Contoh identifikasi cepat terhadap antigen pada Infeksi Streptococcus β hemoliticus, Staphylococcus aureus. Neisseria meningitides, Haemophyllus influenza, rotavirus, Cryotococcus neofromans, Vibrio cholera 01, Leptospira



Hambatan aglutinasi 



Reaksi didasarkan pada kompetensi antara ‘particulate’ dengan antigen larut terhadap ‘combining site’ antibody yang terbatas







Reaksi melibatkan hapten yang membentuk kompleks dengan protein, yang selanjutnya dilekatkan pada ‘carrier’



Aglutinasi dengan penambahan antiglobulin 



Tes antihuman globulin = Coomb’s test







Bertujuan untuk mendeteksi antibody ‘non-agglutinating’ dengan cara menambahkan ikatan dengan antibody ke dua







Terdapat dua macam tes; direct antiglobulin test dan indirect antiglobulin test



Tes antiglobulin langsung = direct antiglobulin test =DAT 



Bertujuan untuk menentukan adanya IgG yang melekat pada sel darah pasien, terutama pasien penderita anemia hemolitik auotimun, penyakit hemofilik pada bayi, sensititisasi sel darah merah oleh obat



Tes indirek =indirect antiglobulin test = IAT 



= indirect Coomb’s test terdapat 2 reaksi =



1. Sel darah merah (reagen) ditambah dengan serum pasien (antibody), diinkubasi 37ºC dicuci untuk menghilangkan antibody yang tidak terikat. 2. antihuman globulin (IgG) ditambahkan, untuk memperbesar (enhance) aglutinasi



Ko- aglutinasi 



Sama dengan aglutinasi pasif,







Hanya partikel “inert” memakai bakteri, terbanyak menggunakan Staphylococcus aureus, karena memiliki protein di permukaan luarnya yang dinamakan “protein A” yang secara natural mampu mengabsorbsi Fc dari molekul antibody







Reaksi prozone = perbandingan jumlah antigen terlalu banyak dibanding antibodi menyebabkan kompleks kecil dan hasil terlihat negative







Konsentrasi seimbang (equivalent zone) = perbandingan jumlah antibodi seimbang dengan antigen menyebabkan kompleks besar dan hasil terlihat positif







Reaksi postzone = perbandingan jumlah antibodi terlalu banyak dibanding antigen menyebabkan kompleks kecil dan hasil terlihat negative



Flokulasi 



Uji flokulasi RPR digunakan untuk menentukan antibody nontreponemal (reagin)







Antigen yang digunakan terdiri dari cardiolipin dan lechitin yang diekstraksi dari jantung sapi dan dimurnikan, disuspensikan dalam alcohol, ditambahkan kolesterol untuk mempermudah reaksi







Memiliki daya sifat mengubah daya larut antigen sehingga timbul flokulasi







Karaktristik kinerja ; 1. uji mirip cardiolipin non spesifik terhadap sifilis. Bila teruji reaksif pada tes RPR → tes serologi spesifik = FTA-Abs, TPHA untuk konfirmasi hasil. 2. bila non reaktif =mengesampingkan diagnosa sifilis



……………………………flokulasi 



Pembacaan dihitung dan dilaporkan menurut kriteria ; Flokusi yang terlihat



Pembacaan



Laporan



Flokulasi sedang dan besar



R (reaktif)



Reaktif



Flokulasi kecil



W (weak reaktif)



Sedikit reaktif



Tidak ada flokulasi



N (negative)



Non- reaktif



semoga bermanfaat, semangat belajar & sehat selalu