4-MIKVIR (Kultivasi Virus) - Ana Indrayati - 2016 [PDF]

Citation preview

MIKROBIOLOGI VIROLOGI (KULTIVASI VIRUS) Ana Indrayati [email protected] 08156266891



Fakultas Farmasi Universitas Setia Budi Surakarta



TUJUAN KULTIVASI VIRUS • ISOLASI DAN IDENTIFIKASI SPESIMEN KLINIK • PRODUKSI VAKSIN



• RISET: STRUKTUR VIRUS, SIKLUS MULTIPLIKASI, GENETIK, EFEK VIRUS PADA SEL INANG



METODE KULTIVASI VIRUS • SISTEM BIOLOGI (in vivo) • Inang asli • Hewan transgenik • Hewan percobaan • KULTUR SEL (in vitro) • TELUR BEREMBRIO (in vovo: in vitro-in vivo)



KULTIVASI VIRUS PADA INANG ASLI



Peppers infected by mild mottle virus



Yellow mosaic symptoms on lettuce caused by Lettuce mosaic virus.



Fruit distortion on eggplant fruit caused by Tomato bushy stunt virus



Human virus: • • • •



Chickens with Newcastle Disease



Schmallenberg virus: domba dan kambing, fetal malformation



•



Herpesvirus (HSV) Human immunodeficiency virus (HIV) Human T-lymphotropic virus (HTLV) Measles virus (MV): campak (MMR-> Morbili , Measles Rubela) Rotavirus A



KULTIVASI VIRUS PADA HEWAN PERCOBAAN



intraserebral



intraperitoneal



subkutan



intranasal



PENGAMATAN • Gejala penyakit • Timbul lesi • Dibunuh sehingga jaringan yang terinfeksi dipelajari



INOKULASI VIRUS PADA HEWAN TRANSGENIK



Mice Two of several mouse lines, TgPVR1 and TgPVR21, derived in Dr A. Nomoto’s laboratory (6, 7), were evaluated in the investigative stage of the study. TgPVR1 mice contained more copies of the poliovirus receptor (PVR) and were more sensitive to poliovirus, whereas TgPVR21 mice with a lower PVR copy number were less sensitive Bulletin of the World Health Organization 2003, 81 (4)



INOKULASI VIRUS PADA TELUR BEREMBRIO • 1931: Goodpasture dan Burnet pertama kali menggunakan telur ayam berembrio untuk kultivasi virus. • Inokulasi virus pada telur berembrio dapat digunakan untuk: • Identifikasi virus • Menyimpan kultur stok virus • Produksi vaksin



INOKULASI DAN DETEKSI PERTUMBUHAN VIRUS • EMBRIO AYAM, BEBEK, KALKUN-> New castle disease (ND) • TELUR YANG DIGUNAKAN DAN TEKNIK INOKULASI VIRUS HARUS STERIL: BEBAS KONTAMINAN JAMUR DAN BAKTERI



 DETEKSI  Embrio mati  Embrio tidak berkembang  Discrete opaque spots called pocks



Morfologi pocks pada membran korioalantois (inkubasi 72 jam)



BAGIAN-BAGIAN TELUR BEREMBRIO        



Cangkang telur : pelindung utama telur, memiliki pori-pori untuk keluarmasuknya udara. Membran cangkang: selaput tipis pada cangkang telur. Rongga udara: sumber oksigen bagi embrio. Keping germinal (embrio): calon individu baru. Kuning telur (yolk): sumber makanan bagi embrio. Putih telur (albumin): pelindung embrio dari goncangan, cadangan makanan dan air Membran dan cairan alantois: tempat pembuangan Amnion: melindungi embrio dari kerusakan fisik



RUTE INOKULASI



RUTE DAN UMUR EMBRIO TERGANTUNG DARI JENIS VIRUS YANG AKAN DIINOKULASI • Rous sarcoma virus: membran chorioallantoic dari embrio berusia 9-11 hari dan akan dihasilkan pocks 5-10 hari setelah infeksi • Virus bronkitis: kuning telur dari embrio berusia 5-6 hari



KULTUR SEL



KULTUR SEL (CELL CULTURE) ATAU CELL LINE: sel yang diambil dari jaringan/organ (hewan, tanaman) kemudian ditumbuhkan di laboratorium pada kondisi terkontrol-> lingkungan semirip mungkin dengan asalnya



BEBERAPA CONTOH KULTUR SEL



Sel vero berasal dari ginjal monyet hijau Afrika



Susceptible Cell Lines Herpes Simplex VZV CMV Adenovirus Poliovirus Coxsackie B Echo Influenza A Influenza B Parainfluenza Mumps RSV Rhinovirus Measles Rubella



Vero Hep-2, human diploid (HEK and HEL),human amnion human diploid (HEL, HEK) human diploid fibroblasts Hep2, HEK, MK, BGM, LLC-MK2, human diploid, Vero, Hep-2,Rhadomyosarcoma MK, BGM, LLC-MK2, vero, hep-2 MK, BGM, LLC-MK2, human diploid, Rd MK, LLC-MK2, MDCK MK, LLC-MK2, MDCK MK, LLC-MK2 MK, LLC-MK2, HEK, Vero Hep-2, Vero human diploid (HEK, HEL) MK, HEK Vero, RK13



 HEK: Human Embryonic Kidney  Midkine: (MK or MDK) atau neurite growthpromoting factor 2 (NEGF2)



Jaringan hati pasien pederita HCC (15 th)



TERIMA KASIH