II. Laporan KCV [PDF]

Citation preview

KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM BAB 1



PENDAHULUAN



1.1 Latar Belakang Umumnya telah diketahui bahwa proses isolasi biasanya dilakukan dengan cara kromatografi. Kromatografi merupakan salah satu metode pemisahan komponen-komponen campuran dimana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan secara selektif. Bila fasa gerak berupa gas, disebut kromatografi gas, dan sebaliknya kalau fasa gerak berupa zat cair, disebut kromatografi cair . Kromatografi Cair Vakum (KCV) merupakan salah satu metode fraksinasi yaitu dengan memisahkan crude extract menjadi fraksifraksinya yang lebih sederhana. Pemisahan tersebut memanfaatkan kolom yang berisi fasa diam dan aliran fasa geraknya dibantu dengan pompa vakum. Prinsipnya yaitu adsorpsi dan partisi yang dipercepat bantuan pompa vakum. Keuntungan dari metode ini adalah prosesnya cepat dan



senyawa



tertarik



secara



sempurna.



Kerugiannya



adalah



pemisahanya tidak sempurna karena senyawa yang ditampung bercampur dalam suatu penampungan tidak seperti pada kolom konvensional



yang



dipisahkan



berdasarkan



warna,



sehingga



pemisahannya lebih maksimal. Pada praktikum ini akan dilakukan percobaan yaitu kromatografi cair vacum (KCV) atau kromatografi Suction Column atua Vacum SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM liquid chromatography (VLC).Kromatografi cair vacum (KCV) adalah bntuk kromatografi kolom yang khususnya berguna untuk fraksinasi kasar yang cepat terhadap suatu ekstrak. Konsdisi vakum adalah alternatif untu mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah. 1.2.Maksud Dan Tujuan 1.2.1 Maksud .Adapun



maksud



dari



praktikum



ini



yaitu



Untuk



mengisolasi komponen kimia dengan menggunakan metode kromatografi kolom cair vakum pada fraksi n-heksan daun paku hata ( lygodium circinatum) 1.2.2 Tujuan Adapun tujuan percobaan ini yaitu untuk memisahkan senyawa kimia fraksinasi n-heksan kasar daun paku hata ( lygodium circinatum) menggunakan kromatografi kolom cair vakum berdasarkan warna dan tingkat kepolaran. 1.2.3 Prinsipp kerja Prinsip kerja dari Kromatografi Cair Vakum (KCV) adalah adsorpsi atau serapan, sedangkan pemisahannya didasarkanp ada senyawa-senyawa yang akan dipisahkan terdistribusi di antara fasa diam dan fasa gerak dalam perbandingan yang berbeda-beda BAB II



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM TUNJAUAN PUSTAKA II.1. Uraian Tanaman 1 Klasifikasi daun paku hata (www.ities.gov). Kingdom : Plantae Divisi : Pteridophyta Kelas : Filicinae Ordo : Filicales Family : Schizaceae Genus : Lygodium 2 Nama daerah 1) Pasundan dikenal dengan nama paku hatta 2) Polewali dikenal dengan nama paku 3 Morfologi Habitat daerah terbuka, rhizome menjalar



kebawah



permukaan tanah, rachis memanjat, percabangan d, warna rachis hijau kecokelatan, panjang ruas rachis primer 24 cm, panjang ruas rachis sekunder 6,5 cm. rachis fertile; percabangan dikotom, warna rachis hijau kecokelatan, cara tumbuh melilit, arah putaran kaan, panjang luas rachis primer 13,4 cm, panjang ruas rachis sekunder 3 cm. 4 Kandungan kimia Daun paku hata mengandung senyawa kimia tannin katekol dan saponin. 5 Khasiat 1) Sebagai obat luka 2) Sebagai obat sengatan bilangan 3) Tunas muda dapat digunakan sebagai bahan makanan II.2 Teori Umum Kromatografi



Suction



Column



atau



vacuum



liquid



chromatography (VLC) atau kromatografi cair vakum (KCV) adalah bentuk kromatografi kolom khususnya berguna untuk fraksinasi kasar SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM yang cepat terhadap suatu ekstrak. Kondisi vakum adalah alternatif untuk mempercepat aliran fase gerak dari atas ke bawah. Metode ini sering digunakan untuk fraksinasi awal dari suatu ekstrak non polar atau ekstrak semipolar (Raymond, 2006). Kromatografi kolom cair dapat dilakukan pada tekanan atmosfer atau pada tekanan lebih besar dari atmosfer dengan menggunakan bantuan tekanan luar misalnya gas nitrogen. Untuk keberhasilan praktikan di dalam bekerja dengan menggunakan kromatografi kolom vakum cair, oleh karena itu syarat utama adalah mengetahui gambaran pemisahan cuplikan pada kromatografi lapis tipis (Harris, 1982). Kromatografi kolom cair dapat dilakukan pada tekanan atmosfer atau pada tekanan lebih besar dari atmosfer dengan menggunakan bantuan tekanan luar misalnya gas nitrogen. Untuk keberhasilan praktikan di dalam bekerja dengan menggunakan kromatografi kolom vakum cair, oleh karena itu syarat utama adalah mengetahui gambaran pemisahan cuplikan pada kromatografi lapis tipis (Harris, 1982). Kromatografi vakum cair dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai absorben dan berbagai perbandingan pelarut nheksana : etil asetat : metanol (elusi gradien) dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan eluen (Helfman, 1983). SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM Kromatografi



merupakan



salah



satu



metode



pemisahan



komponen-komponen campuran dimana cuplikan berkesetimbangan di antara dua fasa, fasa gerak yang membawa cuplikan dan fasa diam yang menahan cuplikan secara selektif. Bila fasa gerak berupa gas, disebut kromatografi gas, dan sebaliknya kalau fasa gerak berupa zat cair, disebut kromatografi cair (Hendayana, 1994). Adapun cara kerja kromatografi cair vakum yaitu kolom kromatografi dikemas kering (biasanya dengan penjerap mutu KLT 1040 μm) dalam keadaan vakum agar diperoleh kerapatan kemasan maksimum. Vakum dihentikan, pelarut yang kepolarannya rendah dituangkan ke permukaan penjerap lalu divakumkan lagi. Kolom dipisah sampai kering dan sekarang siap dipakai (Hostettman, 1986). Kromatografi ialah cara pemisahan berdasarkan perbedaan kecepatan zat-zat terlarut yang bergerak bersama-sama dengan pelarutnya pada permukaan suatu benda penyerap. Cara ini umum dilakukan pada pemisahan zat-zat berwarna (bahasa Yunani: chromos = warna) (Kennedy, 1990). Kromatografi vakum cair merupakan salah satu jenis dari kromatografi kolom. Kromatografi kolom merupakan suatu metode pemisahan campuran larutan dengan perbandingan pelarut dan kerapatan dengan menggunakan bahan kolom. Kromatografi kolom lazim digunakan untuk pemisahan dan pemurnian senyawa (Schill, 1978). SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



BAB III METODE KERJA III. 1. Alat dan Bahan 1 Alat Alat yang digunakan pada praktikum ini adalah batang pengaduk, botol coklat, cawan porselin, gelas ukur, kertas saring, klem, pipet tetes, seperangkat alat KCV, statif, timbangan analitik, 2 Bahan Bahan yang digunakan pada praktikum ini adalah aluminium foil, fraksi n-heksan daun paku (Lygodium circinatum ), etil-asetat, kapas, kertas saring, methanol, n-hexan, silika gel kasar dan halus, dan tisu. III.2. Cara Kerja (Anonim, 2016) SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM 1. Penyiapan Kolom Kromatografi Kolom Cair Vakum Alat-alat perangkat kromatografi kolom cair vakum dicuci dengan metanol dan dikeringkan, dirangkai alat kolom dan ditegakkan dengan bantuan statif dan klem. 2. Pengemasan fase Diam Ditimbang silika kasar sebanyak 10 gram dan 10 gram silica halus, dalam praktikum ini pengemasan fase diam menggunakan metode cara kering dengan cara memasukkan langsung kedalam kolom. 3. Penyiapan fraksi Disiapkan alat



dan



bahan,



ditimbang



fraksi



n-heksan



sebanyak 1 gram, dan fraksi n-heksan siap digunakan. 4. Prosedur Kerja Kromatografi Kolom Cair Konvensional Disiapkan alat dan bahan, Kolom yang telah dipasang dimasukkan kapas ke dalam kolom (dasar kolom) diberi kapas, kemudian dimasukkan silica gel kedalam kolom lalu dimasukkan nheksan untuk memampatkan, kemudian dimasukkan kertas saring, lalu



dimasukkan



sampel



perlahan-lahan,



dan



kemudian



dimasukkan perbandingan eluen satu-persatu mulai dari non-polar hingga polar, perbandingannya yaitu: n-neksan : etil asetat 10:0, 9:1, 8:2, 7:3, 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, dan 0:10. Masing-masing eluen dibuat 50 mL. Ditampung dalam botol UC kemudian diamati warnanya.



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN IV.1. Hasil Pengmatan



Fraksi 1



Botol 10 : 0



Warna Hijau kekuningan



2



9:1



Kuning muda



3



8:2



Hijau tua



4



7:3



Hijau kehitaman



5



6:4



Hijau kecokelatan



6



5:5



Cokelat kehijauan



7



4:6



Cokelat gelap



8



3:7



Cokelat kehitaman



9



2:8



Cokelat gelap



10



1:9



Cokelat



11



0 :10



Cokelat hijau gelap



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



IV.2. PEMBAHASAN Kromatografi



adalah



suatu



teknik



pemisahan



molekul



berdasarkan perbedaan pola pergerakan antara fase gerak dan fase diam untuk memisahkan komponen (berupa molekul) yang berada pada larutan. Molekul yang terlarut dalam fase gerak, akan melewati kolom yang merupakan fase diam. Molekul yang memiliki ikatan yang kuat dengan kolom akan cenderung bergerak lebih lambat dibanding molekul yang berikatan lemah. Dengan ini, berbagai macam tipe molekul dapat dipisahkan berdasarkan pergerakan pada kolom. Kromatografi vakum cair (KVC) merupakan kromatografi yang dilakukan untuk memisahkan golongan senyawa metabolit sekunder secara kasar dengan menggunakan silika gel sebagai adsorben dan berbagai perbandingan pelarut n-heksana : etil asetat (elusi gradien) dan menggunakan pompa vakum untuk memudahkan penarikan eluen. Sampel yang digunakan adalah fraksi n-heksan daun paku hata ( lygodium circinatum). SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM Dibandingkan dengan metode lain Kromatografi Vakum Cair memiliki kelebihan dan kekurangan dalam proses pemisahan senyawa, KVC mempunyai kelebihan yaitu Konsumsi fase gerak KCV hanya 80% atau lebih kecil dibanding dengan kolom konvensional karena pada kolom mikrobor kecepatan alir fase gerak lebih lambat (10-100μl/menit), adanya aliran fase gerak lebih lambat membuat kolom mikrobor lebih ideal jika digabung dengan spectrometer massa, sensitivitas kolom mikrobor ditingkatkan karena solute lebih pekat karenanya jenis kolom ini sangat bermanfaat jika jumlah sampel terbatas missal sampel klinis. Sedangkan kekurangan KCV yaitu membutuhkan waktu yang cukup lama, dan sampel yang dapat digunakan terbatas. Pada percobaan ini dilakukan identifikasi fraksi n-heksan daun paku



hata



kromatografi



(



lygodium



kolom



cair



circinatum vakum.



)



menggunakan



Dimana



metode



ini



metode dapat



memisahkan suatu komponen kimia dengan bantuan tekanan berupa pompa vakum sehingga pemisahan senyawa dapat lebih optimal. Pada pengerjaan pertama, alat dan bahan yang akan digunakan disiapkan agar dapat meminimalisir dan memperlancar proses pengerjaan.



Selanjutnya



penyiapan



eluen



dari



tingkat



kepolaran terendah hingga yang paling polar yaitu dari non polar hingga yang paling polar (n-heksan: etil asetat (10:0, 9:1, 8:2, 7:3, SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM 6:4, 5:5, 4:6, 3:7, 2:8, 1:9, 0:10). Hal ini dilakukan agar dapat mengetahui pada tingkat kepolaran berapa senyawa atau komponen kimia sampel dapat membentuk fraksi yang baik atau terelusi dengan baik . Selanjutnya serangkaian alat kromatografi kolom cair vakum dipasang pada statif yang sebelumnya kolom telah dibersihkan menggunakan pelarut methanol, agar meminimalkan kontaminasi kolom dari pelarut dan bahan-bahan lain yang dapat mengganggu aktivitas dari pemisahan komponen kimia sampel. Kemudian dimasukkan silica gel 30 : 10. Selanjutnya dielusi dengan pelaruta nheksan agar fase diam atau silica gelnya mampat. Dimasukkan fraksi n-heksan daun paku hata ( lygodium circinatum ) sebanyak 1 gram. Ditambahkan eluen pertama dan dinyalakan pompa vakum hingga fraksi tertampung dalam kolom kedua, selanjutnya fraksi ditampung didalam botol. Botol yang digunakan diusahakan bermulut besar agar pelarut dapat menguap dengan sempurna dan menghasilkan cairan kental berupa komponen kimia sampel. Dilanjutkan pengerjaan yang sama untuk eluen yang lain dan diamati pada



eluen



dengan



kepolaran



berapa



dapat



menghasilkan



pemisahan senyawa secara optimal. Dengan menggunakan metode kromatografi kolom cair vakum, dimana berguna untuk fraksinasi kasar dengan cepat pada fraksi n-heksan daun paku hata ( lygodium circinatum ) hasil SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM percobaan dapat disimpulkan bahwa dengan menggunakan metode kromatografi kolom cair vakum didapatkan 11 fraksi Dari perbandingan 10:0 sampai pada perbandingan 0:10 didapatkan 11 hasil fraksi yang berbeda warna dan ditotolkan pada lempeng KLT untuk di uji dibawah sinar UV254 nm dan sinar UV366 nm. Dari hasil penyinaran UV ternyata pada perbandingan eluen 6:4 memberikan hasil fraksi yang baik dibandingkan perbandingan eluen fraksi-fraksi yang lain.



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



BAB V



PENUTUP



V.1 Kesimpulan Berdasarkan praktikum yang telah di lakukan, maka dapat disimpulkan



bahwa dari 11 perbadingan eluen yang digunakan



hanya perbandingan n-heksan: etil



6:4 yang menunjukkan hasil



kepolaran yang sangat baik dengan ditandai pembentukan noda yang jelas dan terang pada lempeng KLT dibawah sinar UV. V.2 Saran Diharapkan untuk ketertiban dari praktikan pada saat praktikum aga praktikum dapat berjalan lancar.



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



DAFTAR PUSTAKA Harris,et.al.,



1982. AN



Introduction



To



Chemical



Analysis, Savders CollegePublishing Philadelpia, Holt-Savders : Japan Heftmann, E. 1983. “Steroids dalam Kromatograf”. Fundamentals and Aplication: Amsterdam. Raymond G. Reid and Satyajit D. Sarker. 2006. “Isolation of Natural Products by Low-Pressure Column Chromatography”. Humana Press Inc. Totowa: New Jersey.s Hendayana, Sumar, dkk. 1994. “Kimia Analitik Instrumentasi”. IKIP Semarang Press: Semarang. Hostettmenn, K, dkk. 1986. “Cara Kromatografi Preparatif”. ITB: Bandung. Kennedy, John. 1990. “Analytical Sounders College Publishin: New York.



Chemistry



Principles”.



Schill, Goran. 1978. “Separation Methods”.Swedish PhasmaCentrical Press: Stockholm. http///ities.gov/servlet/SingleRpt/SingleRpt? search_topic=TSN&search_value=36481; 21 oktober, 04.10.



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



LAMPIRAN 1 Gambar berdasarkan perbandingan eluen



Eluen 10 : 0 Warna : hijau kekuningan



Eluen 9 : 1 Warna : kuning muda



Eluen 8 : 2 Warna : Hijau tua



Eluen 7 : 3 Warna : Hijau kehitaman



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



Eluen 6 : 4 Warna : Hijau kecokelatan



Eluen 5 : 5 Warna : cokelat kehijauan



Eluen 4 : 6 Warna : cokelat gelap



Eluen 7 : 3 Warna : cokelat kehitaman



Eluen 2 : 8



Eluen 1 : 9 Warna : cokelat



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM Warna cokelat gelap



Eluen 0 : 10 Warna cokelat hijau gelap Gambar KLT fraksi n-heksan



Setelah disemprot DPPH



UV 366 nm



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



UV 256



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM FRAKSI DAUN PAKU HATA (Lygodium circinatum) ASAL DAERAH DESA MANGGALUNG, KEC. MANDALLE, KAB. PANGKEP SULAWESI SELATAN



OLEH : NAMA



: SRI NURWAHIDA A.



STAMBUK



: 15020130217



KELAS



: C7/C8



KELOMPOK



: III ( TIGA )



ASISTEN



: ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



Program Studi Farmasi Laboratorium Farmakognosi-Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Muslim Indonesia Makassar 2016



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt



KROMATOGRAFI KOLOM CAIR VAKUM



SRI NURWAHIDA A. 15020130217



ZULFAHMI HAMKA S.Farm.,Apt