Pengujian Thimerosal Pada Vaksin Pentabio [PDF]

Citation preview

RANI NURFITRIANI. Perbandingan Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Teknik Pengocokan secara Konvensional dan Menggunakan Alat Separatory Funnel Holder pada Tahap Preparasi. Dibimbing oleh RATNAWATI LILASARI DJANIS dan IRMA RIYANTI.



RINGKASAN



PT Biofarma merupakan badan usaha milik negara (BUMN) yang bergerak dibidang farmasi yang memproduksi vaksin.



Untuk menjaga mutu produk,



perusahaan ini melakukan pengawasan mutu produk melalui pengujian yang dilakukan di laboratorium Departemen Pengujian Mutu (PM). Salah satu parameter yang dilakukan dalam pengujian mutu adalah penetapan kadar thimerosal dalam vaksin multi dosis menggunakan metode spektrofotometri sinar tampak. Selama ini, dalam metode tersebut dilakukan pengocokan secara konvensional dalam proses preparasi. Karena proses uji memerlukan waktu yang cukup lama, maka untuk memepercepat waktu uji perusahaan melakukan modifikasi dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder untuk proses pengocokan dalam preparasi uji. Oleh karena itu, perlu dilakukan perbandingan hasil penetapan kadar thimerosal secara konvensional dengan hasil penetapan kadar thimerosal dengan Separatory Funnel Holder. Percobaan ini bertujuan membandingkan hasil uji penetapan kadar thimerosal dalam vaksin secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik pengocokan secara konvensional dan menggunakan alat Separatory Funnel Holder. Hasilnya dibandingkan dengan persyaratan perusahaan yang mengacu pada peraturan WHO (World Health Organization). Percobaan dilakukan melalui tiga tahap yaitu persiapan, analisis sampel, dan pengolahan data. Tahap persiapan meliputi pembuatan larutan dithizon encer, natrium asetat dan pembuatan standar thimerosal 0,01%. Tahap analisis sampel meliputi penetapan kadar thimerosal dalam vaksin pentabio secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik pengocokan secara konvensional dan menggunakan alat



Separatory Funnel Holder, sedangkan



untuk akurasi digunakan standar



0,01%



sebagai sampel. Data yang diperoleh diihitung kadarnya menurut standar 0,012% dan standar 0,006%, kemudian masing-masing hasilnya di rata-ratakan. Hasil analisis berupa rata-rata kadar thimerosal dari masing-masing metode tersebut dibandingkan dengan menggunakan uji statistik ANOVA dan dibandingkan dengan persyaratan yang telah disepakati perusahaan. Berdasarkan percobaan, pengocokan dengan alat Separatory Funnel Holder pada skala 80 rpm dan 90 rpm dengan pengocokan konvensional tidak berbeda nyata, sedangkan pengocokan dengan alat Separatory Funnel Holder pada skala 70 rpm dengan pengocokan konvensional berbeda nyata. Oleh karena itu, skala 70 rpm tidak disarankan untuk penetapan kadar thimerosal dalam vaksin.



Perbandingan Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Teknik Pengocokan secara Konvensional dan Menggunakan Alat Separatory Funnel Holder pada Tahap Preparasi



LAPORAN PRAKTIK KERJA LAPANG Diajukan Guna Melengkapi Syarat Pendidikan Diploma Tiga



Oleh: RANI NURFITRIANI NIM: 126512



Pembimbing 1



Pembimbing II



Ratnawati Lilasari Djanis, M.Pd.



Irma Riyanti,S.Si.,Apt.



Direktur Politeknik AKA Bogor



Ir. Maman Sukiman, M. Si.



POLITEKNIK AKA BOGOR 2015



PRAKATA



Puji syukur saya panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala rahmat dan karuniaNya sehingga penulis dapat menyelesaikan Laporan Praktik Kerja Lapang yang berjudul “Perbandingan Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Teknik pengocokan secara Konvensional dan menggunakan alat Separatory Funnel Holder pada Tahap Preparasi”. Penyelesaian laporan ini tidak lepas dari bantuan beberapa pihak, untuk itu penulis mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ibu Ratnawati Lilasari Djanis, M.Pd. sebagai pembimbing I atas kesedian dan kesabaran untuk memberikan bimbingan, arahan, dan motivasi kepada penulis selama melaksanakan PKL serta dalam penyusunan laporan PKL. 2. Ibu Irma Riyanti,S.Si.,Apt. sebagai pembimbing II yang telah memberikan pengarahan, bimbingann, dan saran dalam melaksanakan praktik kerja lapang. 3. Direktur



Akademi Kimia Analisis Bogor, Bapak Ir. Maman Sukiman,



M.Si. beserta seluruh staf pengajar dan karyawan yang telah memberi bekal ilmu pengetahuan sebelum saya melaksanakan PKL. 4. Ibu Henny Rochaeni, M.Si., selaku dosen wali yang telah membimbing penulis selama kuliah di Akademi Kimia Analisis Bogor. 5. Kedua orang tua Bapak Odik dan Ibu Neneng, adik ku tersayang Ananda Rizki Abdillah, serta seluruh keluarga saya yang tak pernah letih dalam memberikan doa, kasih sayang, semangat serta bantuan moril maupun material yang tak pernah terhitung nilainya kepada penulis. 6. Pak Dori, Pak Cefa, Bu Ega, Pak Feri dan seluruh divisi Penjaminan Mutu, khususnya PMKF (Penjaminan Mutu Kimia Fisika), PT. Biofarma yang telah membimbing, memberi ilmu dan arahan selama PKL. 7. Rahma, Isnat, Luthfi, Bernaz, WEKSWAG, Arabinosa, White House dan AKA Undefinity angkatan 2012 yang telah memberikan semangat, dukungan, dan membantu dalam menyelesaikan tugas akhir.



iv



v



8. Rekan praktik kerja lapangan, yaitu Nurfitriya Wulandari dan Anastasya Caroline D. R atas kebersamaan dan dukungannya selama praktik kerja lapang di PT. BIO FARMA PERSERO 9. Kepada seluruh pihak yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan penyusunan laporan ini, yang tidak dapat disebutkan satu persatu.



Akhir kata, semoga laporan ini dapat bermanfaat bagi seluruh pihak yang membaca dan mempelajari serta bermanfaat pula bagi penulis.



Bogor, September 2015



Penulis



DAFTAR ISI



Halaman PRAKATA ................................................................................................................. iv DAFTAR ISI ............................................................................................................... v DAFTAR TABEL ..................................................................................................... vi DAFTAR GAMBAR ................................................................................................. vii DAFTAR LAMPIRAN ........................................................................................... viii PENDAHULUAN ........................................................................................................ 1 TINJAUAN PUSTAKA .............................................................................................. 3 Vaksin .......................................................................................................................... 3 Vaksin Pentabio ................................................................................................ 4 Thimerosal ................................................................................................................... 6 Spektrofotometri .......................................................................................................... 8 Penetapan Kadar Thimerosal secara Spektrofotometri ................................... 14 ANOVA ...................................................................................................................... 17 PERCOBAAN ........................................................................................................... 18 Waktu dan Tempat ...................................................................................................... 18 Alat dan Bahan ............................................................................................................ 18 Alat ................................................................................................................... 18 Bahan ................................................................................................................ 18 Metode Percobaan ....................................................................................................... 19 Cara Kerja ................................................................................................................... 19 Persiapan ......................................................................................................... 19 Penetapan Thimerosal dengan Pengocokan Konvensional ............................. 20 Penetapan Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan Alat ..................... 21 Pengolahan Data.............................................................................................. 22 HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................................ 23 KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................................ 33 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................ 34 LAMPIRAN ............................................................................................................... 36



vi



DAFTAR TABEL



Nomor



Halaman



1. Kandungan Vaksin Pentabio ........................................................................... 4 2. Nilai Paparan Thimerosal ................................................................................ 8 3. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional ............................................................................ 23 4. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 ............ 24 5. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 .......... 25 6. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 ........... 26 7. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan Konvensional ............................................................... 27 8. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70rpm ............................................................................................................ 28 9. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm .................................................................................................. 29 10. Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm ................................................................................................... 31 11. Hasil perhitungan statistik menggunakan tabel ANOVA ............................. 32



vii



DAFTAR GAMBAR



Nomor



Halaman



1. Skema Susunan Ultra violet - sinar tampak Spektrofotometer ...................... 10



ix



DAFTAR LAMPIRAN



Nomor



Halaman



1. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan Konvensional ................................................................................................. 37 2. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 ................................... 38 3. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 ................................... 39 4. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 ................................... 40 5. Perhitungan ................................................................................................... 41 6. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 ................................. 42 7. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 ................................. 43 8. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 ................................. 44 9. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 .................... 45 10. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 .................... 46 11. Hasil Statistik menggunakan Uji ANOVA Penetapan Kadar Thimerosal dalam standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan Konvensional dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 .................... 47



x



PENDAHULUAN



PT Bio Farma merupakan perusahaan yang bergerak dibidang farmasi dan memproduksi Vaksin. Perusahaan ini melakukan pengawasan mutu produk melalui serangkaian analisis yang dilakukan di laboratorium Departemen Pengujian Mutu (PM). Hal ini bertujuan untuk menjamin produk yang dihasilkan sesuai dengan spesifikasi perusahaan dan layak untuk dipasarkan. Pada pembuatan vaksin, digunakan beberapa bahan tambahan, yaitu pengawet, stabilizer, adjuvant (zat pengikat), enzim dan zat tambahan lainnya. Dalam pengemasannya, satu kemasan vaksin bisa berisi satu dosis dan atau multi dosis. Untuk vaksin multi dosis, diperlukan bahan pengawet yang akan mencegah kontaminasi yang berasal dari luar maupun dalam vaksin (perkembangan bakteri yang tidak terkendali) ketika vaksin sudah dibuka dan atau digunakan agar vaksin terjaga kualitasnya serta tetap aman untuk digunakan. Oleh karena itu, thimerosal digunakan sebagai pengawet yang akan mencegah kontaminasi pada vaksin tersebut. Thimerosal dikategorikan aman digunakan pada vaksin oleh badan WHO (World Health Organization) dalam kadar 0,4 𝜇𝑔/𝐾𝑔/ℎ𝑎𝑟𝑖, dan jika kadar thimerosal melebihi kadar tersebut, Thimerosal yang merupakan turunan merkuri akan berbahaya bagi tubuh. Hal ini mendorong perlunya analisis kadar thimerosal yang digunakan sebagai bahan tambahan vaksin. Untuk menjaga mutu produk, perusahaan ini melakukan pengawasan mutu produk melalui pengujian yang dilakukan di laboratorium Departemen Pengujian Mutu (PM). Salah satu parameter yang dilakukan dalam pengujan mutu adalah penetapan kadar thimerosal dalam vaksin multi dosis menggunakan metode spektrofotometri sinar tampak.



Selama ini, dalam metode tersbeut dilakukan



pengocokan secara konvensional dalam proses preparasi. Karena proses uji memerlukan waktu yang cukup lama, maka untuk memepercepat waktu uji perusahaan melakukan modifikasi dengan menggunakan alat Separatory Funnel Holder untuk proses pengocokan dalam preparasi uji. Oleh karena itu, perlu



1



2



dilakukan perbandingan hasil penetapan kadar thimerosal secara konvensional dengan hasil penetapan kadar thimerosal dengan Separatory Funnel Holder. Percobaan ini bertujuan membandingkan hasil uji penetapan kadar thimerosal dalam vaksin secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik pengocokan secara konvensional dan menggunakan alat Separatory Funnel Holder. Hasilnya dibandingkan dengan persyaratan perusahaan yang mengacu pada peraturan WHO (World Health Organization).



TINJAUAN PUSTAKA



Vaksin



Vaksin adalah hasil upaya manusia dalam pemanfaatan antigen dari mikrob dan antigen ini sekaligus materi utama vaksin. Menurut cara penyajian antigennya, vaksin dibagi menjadi empat macam. Yaitu vaksin inaktivasi, vaksin toksoid, vaksin subunit/ aselular, dan vaksin atenuasi. (Nurul dan Doni, 2014) Vaksin inaktivasi dibuat dari tubuh mikrob secara utuh dalam keadaan yang sudah mati dan mustahil melakukan replikasi. Kekurangan vaksin ini adalah respon imun yang dihasilkan tidak sebaik respon vaksin dengan mikrob hidup dan perlu diberikan lebih dari sekali serta dosis tambahan (booster). Vaksin toksoid dibuat dari mikrob yang sudah mati. Tapi yang dimanfaatkan adalah toksin yang dikeluarkan oleh mikrob tersebut yang sudah diolah menjadi tidak berbahaya (dengan inaktivasi oleh garam aluminum atau formaldehid). Dalam vaksin ini ditambahkan adjuvant agar antigen cukup kuat untuk memicu respon imun tubuh. Kekurangannya sama dengan vaksin inaktivasi, yaitu respun imun tidak sebaik respon vaksin dengan mikrob hidup dan diperlukan lebih dari sekali vaksinasi. Vaksin subunit/aselular dibuat dari potongan tubuh mikrob tertentu (kapsul, flagela atau protein dinding sel).



Subunit atau potongan tubuh mikrob masing-



masing memiliki antigen yang berbeda, potongan tubuh yang dipakai adalah yang antigennya paling mudah dikenali oleh sistem imun. Vaksin atenuasi dibuat dengan pemanfaatan mikrob hasil pelemahan daya replikasinya. Kelebihan dari vaksin ini adalah respon imun yang dihasilkan paling mendekati respon imun yang tercipta akbat infeksi alami dan jumlah antigen dalam tubuh akan bertambah dengan sendirinya tanpa harus vaksinasi ulang. Selain Adjuvant vaksin menggunakan bahan tambahan lain, yaitu pengawet, stabilizer, enzim, larutan penyangga, pengemulsi, pengencer, antibiotik, dll. Thimerosal digunakan dalam vaksin sebagai pengawet yang potensial.



3



4



Vaksin Pentabio



Pentabio adalah Vaksin DTP-HB-Hib (Vaksin Jerap Difteri, Tetanus, Haemophilus influenzae tipe b) berupa suspensi homogen murni yang terdiri dari bakteri pertusis (batuk rejan) inaktif, antigen permukaan infeksius, dan komponen Hib sebagai vaksin bakteri sub unit influenzae tipe b tidak infeksius yang dikonjugasikan kepada bakteri atau virus yang dilemahkan melalui teknologi DNA rekombinan pada sel ragi.



Tabel 1. Kandungan vaksin Pentabio Zat Aktif



Zat Tambahan



Toksoid Difteri murni



Aluminium fosfat



Toksoid Tetanus murn



Thimerosal



B. pertussis inaktif HBsAg Konjugat Hib Sumber: Vaksin dan Vaksinasi (Doni, 2014)



Vaksin digunakan untuk pencegahan terhadap difteri, tetanus, pertusis (batuk rejan), hepatitis B, dan infeksi simultan Haemophilus influenza. Vaksin harus disuntikkan secara intramuskular.



Penyuntikan sebaiknya dilakukan pada



anterolateral paha atas, tetapi dapat menyebabkan luka saraf siatik dan tidak dianjurkan. Pentabio (Vaksin DTP-HB-Hib) tidak boleh digunakan pada bayi yang baru lahir. Di negara-negara dimana pertusis menjadi bahaya tertentu pada bayi, vaksin ini harus dimulai secepat mungkin dalam waktu seminggu, dan dua dosis berikutnya diberikan dengan jarak waktu 4 minggu. Vaksin ini aman dan efektif diberikan bersamaan dengan vaksin BCG, campak, polio (OPV atau IPV), yellow fever. Jika diberikan bersamaan dengan vaksin lain,maka harus disuntikkan pada lokasi yang berlainan.



5



Jenis dan angka kejadian reaksi simpang yang berat tidak berbeda secara bermakna dengan vaksin DTP terpisah. Untuk DTP, reaksi lokal dan sistemik ringan umum terjadi. Beberapa reaksi lokal sementara seperti suntikan disertai demam dapat timbul dalam sejumlah besar kasus. Kadang-kadang reaksi berat seperti demam dapat terjadi dalam 24 jam setelah pemberian. Studi yang dilakukan oleh sejumlah kelompok termasuk United States institute of Medicine, The Advisory asosiasi dokter spesialis anak di Australia, Canada, Inggris dan Amerika, menyimpulkan bahwa data tidak menunjukkan disfungsi sistem saraf kronis pada anak. Vaksin Hib ditoleransi dengan baik. Reaksi lokal dapat terjadi dalam 24 jam setelah vaksinasi.



Reaksi ini biasanya bersifat ringan dan sementara.



Pada



umumnya, akan sembuh dengan sendirinya dan tidak memerlukan tindakan medis lebih lanjut.



Reaksi sistemik ringan seperti demam jarang terjadi setelah



penyuntikkan.



Hubungan kausalitas antara reaksi berat lainnya dan vaksin belum



pernah ditemukan. Hipersensitif terhadap komponen vaksin, atau reaksi berat terhadap dosis vaksin kombinasi sebelumnya merupakan kontraindikasi absolut terhadap dosis berikutnya. Terdapat beberapa kontraindikasi terhadap dosis otak pada bayi baru lahir atau kelainan saraf serius lainnya merupakan kontraindikasi terhadap komponen pertusis sebagai vaksin kombinasi, tetapi vaksin DT harus diberikan sebagai pengganti DTP, vaksin Hepatitis B tidak akan membahayakan individu yang sedang atau sebelumnya telah terinfeksi virus hepatitis B. Vaksin DTP-HB-Hib harus disimpan dan ditransportasikan pada suhu antara (2-8)°C. Vaksin DTP-HB-HIb dari kemasan vial dosis ganda yang sudah diambil satu dosis atau lebih dalam satu sesi imunisasi, berikutnya dapat disimpan selama maksimal sampai 4 minggu. Vaccine Vial Monitor (VVM) merupakan bagian dari etiket Pentabio (Vaksin DTP-HB-Hib) berbentuk noktah berwarna yang berindikator suhu(temperature sensitive) dan berfungsi sebagai indikator adanya akumulasi paparan panas yang dialami oleh petunjuk bagi pemakai apakah vaksin masih dapat digunakan atau tidak. Pembacaan VVM cukup mudah, perhatikan kotak yang berada di tengah lingkaran.



6



Jika warnanya lebih muda daripada bagian lingkaran maka vaksin masih bisa digunakan. Jika warna kotak tersebut berwarna sama dengan warna lingkaran, maka vaksin harus segera dibuang.



Thimerosal



Thimerosal adalah salah satu pengawet antimikroba yang sering digunakan dalam vaksin. Thimerosal sebagai bakteriostatik dan antiseptik fungistik. Senyawa raksa digunakan sebagai pengawet pada sediaan biologi pada kadar (0,01-0,02)% b/v atau pada batas kadar yang lebih rendah yaitu (0,005-0,02)%b/v (MARTINDALE, 1996)



Thimerosal (FARMAKOPE INDONESIA, 1995)



Thimerosal bekerja sebagai antimikroba dengan cara pengikatan secara reversibel antara senyawa raksa dengan gugus sulfhidril pada mikroorganisme. Senyawa raksa sangat toksik pada jaringan, tetapi bila digunakan pada kadar yang sangat kecil dan sesuai dengan ketentuan, bahaya yang mungkin timbul dapat dihindari. Untuk mencegah terjadinya kontaminasi oleh mikroorganisme, maka dalam sediaan ditambahkan pengawet. Pengawet yang ideal adalah pengawet yang pada konsentrasi rendah dapat mencegah tumbuhnya mikroorganisme, tidak toksik bahkan bila digunakan dalam jangka waktu cukup lama, rasa dan bau serta warnanya tidak



7



menyolok, dapat bersatu dengan komponen lain yang ada dalam formulasi serta tidak bereaksi dengan kemasan dan tidak mengiritasi (JACONINI, 1972). Thimerosal mempunyai pemerian warna berwarna krem terang, berbentuk serbuk kristal, berbau dan ringan. Thimerosal mengandung tidak kurang dari 97% dan tidak lebih dari 101,0% C9H9HgNaO2S dihitung terhadap berat kering zat. Thimerosal mudah larut dalam air dan etanol 96% tetapi sukar larut dalam eter (FARMAKOPE INDONESIA, 1995) Thimerosal



atau disebut juga thiomersal atau mercurothiolate merupakan



turunan merkuri yang memiliki nama IUPAC Ethyl(2-mercaptobenzoato-(2-)-0,5). Thimerosal merupakan pengawet yang sangat efektif yang mengandung merkuri, dan telah dipergunakan dalam pembuatan vaksin sejak tahun 1990-an. Efek samping yang dilaporkan berupa sensitivitas kulit yaitu kemerahan yang kejadiannya sangat jarang. (Lina Heriliana, 2001). Thimerosal digunakan sebagai pengamanan terhadap kontaminasi bakteri dan mikrob lain terutama pada vial multi-dosis yang sudah dibuka. Thimerosal sangat efektif untuk membunuh bakteri dalam beberapa jenis vaksin dan untuk mencegah kontaminasi bakeri. (VTTC, 1998). +



Thimerosal mengandung radikal etil merkuri (CH3CH2Hg ) yang berikatan dengan gugus belerang dari thiosalisilat dan diyakini bersifat toksis. Etil merkuri mempunyai waktu paruh yang lebih singkat dibandingkan dengan metil merkuri, sehingga dinyatakan aman untuk digunakan dalam pengawet vaksin.



Hal ini



disebabkan merkuri yang masuk ke dalam tubuh akan terlebih dahulu diekskresi sebelum pemberian vaksin berikutnya. (Silalahi, 2005). Pada penetapan ini, HCl berfungsi sebagai pengatur suasana sedangkan ammonium tiosianat dan EDTA berfungsi sebagai masking agent untuk ion-ion pengganggu agar tidak mengganggu pengukuran thimerosal.



Thimerosal dan



dithizon akan membentuk kompleks berwarna orange. Kompleks yang terbentuk dan dithizon berlebih akan diekstraksi menggunakan toluen.



8



Tabel 2. Nilai paparan Thimerosal sebagai metil-merkuri menurut beberapa Badan Internasional. Nilai metil-merkuri



Badan/Agency



(𝜇𝑔/𝐾𝑔/ℎ𝑎𝑟𝑖)



EPA (Environmental Protection Agency) FDA (Food and Drug Administration) ATSDR (Agency for Toxic Subtances and Disease Regisery) WHO (World Health Organization)



0,1



0,4



0,3 0,4



Sumber: Vaksin dan Vaksinasi (Doni, 2014)



Menurut EPA, nilai paparan thimerosal sebagai metil-merkuri adalah sebanyak 0,1 𝜇𝑔/𝐾𝑔/ℎ𝑎𝑟𝑖. ATSDR menilai bahwa paparan maksimal metil-merkuri perharinya lebih tinggi dari EPA yaitu sebanyak 0,3 𝜇𝑔/𝐾𝑔/ℎ𝑎𝑟𝑖, sedangkan FDA dan WHO memiliki standar paling tinggi untuk paparan maksimal metil-merkuri yaitu sebanyak 0,4 𝜇𝑔/𝐾𝑔/ℎ𝑎𝑟𝑖.



Spektrofotometri



Spektrofotometri adalah suatu metode analisis kimia secara kuantitatif berdasarkan penyerapan radiasi elektromagnetik oleh suatu media yang berupa padatan, larutan atau gas padapanjang gelombang tertentu. Alat yang digunakan disebut spektrofotometer. Spektrofotometer terdiri atas spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan fotometer adalahalat yang mengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau cahaya yang diabsorpsi (KHOPKAR, 2003).



9



Panjang gelombang elektromagnetik berkaitan dengan energi dan hubungan keduanya tersebut dapat digambarkan sebagai berikut: E = h. V



E = h.



𝑪 𝝀



Keterangan: E = Energi yang di absorpsi (erg) H= Tetapan Planck (6,62 x 10-27 erg detik) V = frekuensi (Hz) C = Kecepatan cahaya (3x 1010cm/detik) λ = Panjang gelombang (nm)



Dari persamaan diatas dapat diketahui bahwa semakin pendek panjang gelombang maka semakin besar energi yang dimiliki. Absorpsi cahaya tampak atau cahaya ultraviolet mengakibatkan transisi elektronik yaitu promosi elektron-elektron dari keadaan dasar yang berenergi rendah ke keadaan terekstitasi yang berenergi lebih tinggi. Energi yang terserap selanjutnya terbuang sebagai kalor atau cahaya. Panjang gelombang sinar ultraviolet atau cahaya tampak yang diserap tergantung pada mudahnya promosi elektron. Molekul membutuhkan energi lebih banyak untuk menyerap panjang gelombang yang lebih pendek. Bila sinar monokromatik atau campuran jatuh pada media homogen sebagian dari sinar yang masuk akan dipantulkan, sebagian diserap media tersebut , dan



10



sisanya diteruskan. Jika intensitas sinar masuk dinyatakan oleh I0, intensitas sinar terserap Ia, intensitas sinar teruskan It, intensitas yang dipantulkan Ir, maka:



I0 = Ia + It +Ir



Akan tetapi karena cahaya yang dipantulkan sangat kecil, maka dapat dihilangkan, sehingga diperoleh: I0 = Ia + It



Dari persamaan tersebut terlihat jelas bahwa intensitas cahaya yang masuk lebih besar dari intensitas yang keluar atau diteruskan karena sebagian intensitas tadi telah mengalami penyerapan. Besarnya penyerapan akan sebanding dengan tebalnya media dan kepekatan dari zat, hal ini sessuai dengan hukum Lambert-Beer. Hukum Lambert menyatakan bahwa



bila seberkas cahaya monokromatik



dipancarkan melalui suatu media transparan, maka laju turunnya intensitas cahaya akan berbanding lurus dengan ketebalan media. Hukum Beer menyatakan bila seberkas cahaya monokromatik dipancarkan melalui suatu media transparan, maka laju turunnya intensitas cahaya akan berbanding lurus dengan kepekatan media.



Gambar 2. Skema Susunan UV/Vis Spektrofotometer.



1. Sumber radiasi Sumber radiasi atau sumber cahaya terdiri atas bahan yang dapat tereksitasi ke tingkat energi yang tinggi melalui proses pemanasan dengan



11



bantuan arus listrik dan proses pelepasan elektron pada beda tegangan yang tinggi. Ketika kembali ke tingkat energi yang lebih rendah, bahan akan melepaskan sejumlah foton. Hal yang paling penting dalam pemilihan sumber cahaya adalah harus cepat terdeteksi oleh detektor. Lampu Deuterium digunakan untuk spektrofotometer ultraviolet karena sinar yang dipancarkan mencakup panjang gelombang antara (185-370) nm. Sedangkan untuk



spektrofotometer



Sinar Tampak, digunakan lampu Tungstel



(Wolfram) dengan sinar yang dipancarkan mencakup panjang gelombang antara 350-2200 nm dan spektrum radiasinya



berupa garis lengkung



(KHOPKAR, 2003).



2. Monokromator Monokromator berfungsi memecah radiasi polikromatis dengan pita energi yang lebar yang dihasilkan sumber radiasi menjadi radiasi dengan pita energi yang lebih sempit atau menjadi radiasi monokromatis. Komponen yang penting dari sebuah monokromator adalah suatu sistem celah dan suatu unsur dispersif. Radiasi dari sumber difokuskan ke celah masuk, kemudian disejajarkan oleh sebuah lensa atau cermin sehingga suatu berkas sejajar jatuh ke unsur pendispersi yangberupa prisma atau suatu kisi difaksi. Dengan memutar prisma atau kisi itu secara mekanis, aneka porsi spektrum yang dihasilkan oleh unsur dispersi dipusatkan pada celah keluar dan dari situ lewat jalan optis lebih jauh, porsi-porsi itu akan menjumpai sampel (DAY,1999).



3. Sel Penyerap (Wadah Sampel/kuvet) Wadah sampel (kuvet) terbuat dari kuarsa atau silika untuk radiasi UV dan gelas biasa atau kuarsa untuk radiasi sinar tampak.



Tebal kuvet



bervariasi dari 1-10 cm. Kuvet ditempatkan setelah monokromator supaya kemungkinan terjadinya dekomposisi/fluorescence oleh panjang gelombang berenergi tinggi yang masih ada di dalam radiasi polikromatis dapat



12



diminimalkan.



Posisi permukaan kuvet tegak lurus datangnya radiasi



sehingga kehilangan radiasi akibat pantulan/ refraksi dapat dikurangi. Umumnya kuvet yang digunakan harus memiliki beberapa syarat antara lain: tidak rapuh, tahan terhadap bahan kimia, permukaan optisnya datar dan sejajar, dan transparan atau tidak berwarna sehingga dapat mentransmisikan semua cahaya yang dilaluinya.



4. Detektor Dektektor berfungsi mengubah energi cahaya yang diteruskan menjadi sinyal-sinyal listrik yang dapat dibaca oleh rekorder. Untuk deteksi cahaya ultraviolet dan tampak biasanya digunakan detektor fotolistrik. Detektor yang diinginkan dalam spektrofotometer ialah detektor dengan kepekaan yang tinggi, respon linear terhadap daya radiasi, waktu respon yang cepat, dan kestabilan yang tinggi (DAY,1999).



5. Rekorder Rekorder pada umumnya berfungsi sebagai alat pencatat dari hasil yang diperoleh dari detektor, dengan kata lain energi listrik yang dihasilkan oleh detektor dapat direkam oleh rekorder, yang hasilnya berupa sistem baca atau penyajian hasil pengukuran, baik dalam bentuk absorban, transmitan, dan atau konsentrasi.



Tipe Spektrofotometer



1. Spektrofotometer sinar tunggal (Single-beam ) Spektrofotometer sinar tunggal hanya memiliki satu berkas cahaya dari sumber yang melalui monokromator. Sampel dan pelarut murni (blanko) diperiksa secara terpisah.



13



2. Double-beam Sinar dari monokromator diarahkan ke sel blanko dan sel sampel dengan bantuan beam splitter (chopper). Kedua sinar akan mengarah pada contoh dan blanko yang memungkinkan pembandingan sampel dan blanko pada waktu bersamaan (CRISTIAN, 1994)



Spektrofotometer Serapan Ultra violet - sinar tampak



Spektrofotometer serapan UV- sinar tampak dapat menghitung absorban atau transmitan suatu molekul dikarenakan adanya transisi elektronik spektra absorbsi elektronik yang dihasilkan oleh interaksi antarmolekul yang mempunyai gugus kromofor dengan radiasi elektromagnetik pada daerah ultraviolet-tampak. Prinsip analisis dari spektrofotometer Ultra violet - sinar tampak yaitu berdasarkan pada serapan sinar ultra violet atau sinar tampak terhadap molekulmolekul zat yang dianalisis pada panjang gelombang tertentu. Pemilihan panjang gelombang didasarkan pada spektrum absorpsi dari zat yang diukur yaitu panjang gelombang yang menghasilkan nilai absorbansi terbesar dan memberikan ketelitian yang tinggi. Adapun prinsip kerja dari spektrofotometer Ultra violet - sinar tampak adalah sumber cahaya yang datang berupa sinar monokromatik yang kemudian diteruskan melalui sel yang berisi sampel. Sebagian sinar akan diserap oleh sel dan sebagian lagi akan dieteruskan ke foto sel yang berfungsi untuk merubah energi cahaya menjadi energi listrik. Energi listrik yang dihasilkan oleh fotosel memberikan signal pada detektor yang kemudian akan diubah menjadi nilai serapan (absorban) dari zat yang dianalisis.



14



Penetapan Kadar Thimerosal secara Spektrofotometri



Dalam analisis secara spektrofotometri, larutan sampel sebaiknya meneruskan cahaya pada satu panjang gelombang. Dalam menetapkan kadar suatu senyawa secara spektrofotometri, pereaksi mempunyai peranan yang sangat penting. Ada beberapa faktor yang perlu dipertimbangkan, yaitu: 1. Pereaksi harus bereaksi selektif dengan senyawa yang akan ditetapkan kadarnya. Pereaksi yang dipilih tidak menyebabkan bercampurnya pembentuk warna dengan senyawa lain yang mungkin sama seperti dalam sampel. 2. Pemilihan kondisi terhadap pereaksi sehingga diperoleh pembentuk kompleks berwarna yang optimum.kondisi yang diperhatikan adalah pH, komposisi larutan, urutan penambahan pereaksi, waktu yang diperlukan untuk pembentukan warna, dan stabilitas warna. 3. Kompleks berwarna yang terbentuk untuk pengukuran harus mempunyai absorptivitas molar yang cukup besar sehingga senyawa dapat ditetapkan kadarnya pada jarak konsentrasi sampel yang sebenarnya (FRITZ, 1978).



Penetapan kadar thimerosal dapat dilakukan melalui pembentukan kompleks antara beberapa pelarut,



misalnya kloroform,



dan zat



pembentuk warna



difeniltiokarbazon (ditizon). Senyawa raksa dalam thimerosal dan ditizon membentuk kompleks berwarna kuning sampai hijau. Intensitas warna dari kompleks yang terbentuk tergantung pada jumlah raksa yang berikatan dengan ditizon yang merupakan dasar penetapan kadar senyawa raksa secara spektrofotometri. Kompleks yang terbentuk dan dithizon berlebih diekstraksi dengan toluena. Kelebihan ditizon akan dibaca oleh spektrofotometer sehingga kadar thimerosal dapat dihitung dengan penetapan blanko. Identifikasi thimerosal menggunakan spektrofotometer dilakukan dengan cara membandingkan spektrum infra merah yang dihasilkan oleh ditizon sisa dalam hasil



15



ekstraksi menggunakan metode pengujian ekstraksi manual dengan ekstraksi menggunakan alat separatory funnel holder. Dimana pengujian dilakukan sebanyak enam kali untuk sampel uji yang sama dan membandingkan hasil pengukuran yang diperoleh dari kedua metode tersebut untuk memastikan tidak adanya perbedaan yang nyata dari kedua metode yang di gunakan.



Penetapan Kadar Thimerosal sebagai Senyawa Raksa



Ion raksa membentuk kompleks berwarna kuning dengan ditizon dan memberikan spektrum serapan didaerah sinar tampak. Dengan metode ini hal yang paling berperan adalah pengaturah pH yang tepat yang dapat menghilangkan gangguan senyawa logam lain yang terdapat dalam vaksin. Ditizhone adalah serbuk berwarna agak hitam dengan rumus molekul C3H12N4S dan berat molekul 256,3 g/mol. Ditizon larut dalam kebanyakan pelarut organik, tetapi sedikit larut dalam hidrokarbon. Pelarut yang digunakan dalam pembuatan larutan ditizon adalah toluen (BRITISH PHARMACOPOEIA, 1995) Ditizon mempunyai kemampuan berautomerisasi dalam bentuk keto dan enol, dimana keto dapat terbentuk dalam larutan asam, sedangkan enol dalam larutan basa. Struktur dithizon berautomerisasi menjadi bentuk keto dan enolnya adalah sebagai berikut:



Bentuk keto (A) dan enol (B) Ditizhone setelah berikatan dengan Hg



16



Sedangkan reaksi yang terjadi antara ditizon dengan thimerosal adalah sebagai berikut:



Hg2+ +2H2C13H10N4S



↔ Hg (HC13H10N4S)2 + 2H+



Kompleks Raksa Ditizonat



Biasanya kompleks dapat terbentuk pada pH 1-3. Suasana asam diperoleh dengan penambahan asam sulfat atau asam klorida. Pengatur suasana yang digunakan dalam penetapan ini ialah asam klorida karena kecenderungan ion klorida untuk membentuk kompleks yang lebih kuat dari ion lain dalam suasana asam (BRITISH PHARMACOPOEIA, 1993). Kemampuan beratuoremisasinya menyebabkan asam asetat digunakan untuk mencegah perubahan warna yaitu dari jingga terang ke biru terang. Ion logam yang terdapat dalam penetapan ini yang seharusnya tidak ada atau kalaupun ada harus dalam konsentrasi rendah seperti tembaga, perak, emas, atau bismut dapat diatasi dengan penambahan EDTA.(VTTC, 1998)



17



ANOVA



Statistika merupakan suatu ilmu pengetahuan yang berhubungan dengan caracara mengumpulkan fakta/data, kemudian menganalisis data tersebut sehingga dapat diperoleh suatu kesimpulan atau keputusan. Analisis of variance atau ANOVA merupakan salah satu teknik analisis multivariate yang berfungsi untuk membedakan rerata lebih dari dua kelompok data dengan cara membandingkan variansinya. Analisis varian termasuk dalam kategori statistik parametric. Sebagai alat statistika parametric, maka untuk dapat menggunakan rumus ANOVA harus terlebih dahulu perlu dilakukan uji asumsi meliputi normalitas, heterokedastisitas dan random sampling (Ghozali, 2009). ANOVA dapat dilakukan untuk menganalisis data yang berasal dari berbagai macam jenis dan desain penelitian. ANOVA banyak dipergunakan pada penelitianpenelitian yang banyak melibatkan pengujian komparatif yaitu menguji variabel terikat



dengan



cara



membandingkannya



pada



kelompok-kelompok



sampel



independen yang diamati. Analisis varian saat ini banyak digunakan dalam penelitian survey dan penelitian eksperimen. One-way anova dilakukan untuk menguji perbedaan dua kelompok atau lebih berdasarkan satu variabel independen.



PERCOBAAN



Waktu dan Tempat



Percobaan ini dilakukan di Laboratorium bagian PMKF (Pengujian Mutu Kimia Fisika) divisi pengawasan mutu di PT. Bio Farma yang berlokasi di Bandung, Jawa Barat pada bulan Juni 2015.



Bahan dan Alat



Bahan



Bahan yang digunakan dalam percobaan ini dibagi menjadi dua, yaitu bahan uji dan pereaksi.



Bahan uji yang digunakan adalah standar Thimerosal 0,01%,



thimerosal 0,012%, dan Vaksin Pentabio. Pereaksi yang digunakan terdiri dari asam klorida 2 N, natrium asetat 2 N, titriplex (EDTA III) 0,01 M, amonium tiosianat jenuh, ditizon encer (segar), dan air murni.



Alat



Alat-alat yang digunakan dalam percobaan antara lain spektrofotometer Shimadzu UV-1601, neraca analiatik Metler Toledo, Separatory Funnel Holder, mikropipet, dispenser pipet, stepper pipet, corong pemisah, rak tabung reaksi, tabung reaksi, kuvet, dan rak corong pemisah.



18



19



Metode Percobaan



Percobaan dilakukan melalui tiga tahap yaitu persiapan, analisis sampel, dan pengolahan data. Tahap persiapan meliputi pembuatan larutan dithizon encer, natrium asetat dan pembuatan standar thimerosal 0,01%. Tahap analisis sampel meliputi penetapan kadar thimerosal dalam vaksin pentabio secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik pengocokan secara konvensional dan menggunakan alat Separatory Funnel Holder, sedangkan



untuk akurasi digunakan standar



0,01%



sebagai sampel. Data yang diperoleh diihitung kadarnya menurut standar 0,012% dan standar 0,006% yang lalu masing-masing hasilnya di rata-ratakan. Hasil analisis berupa rata-rata kadar thimerosal dari masing-masing metode tersebut dibandingkan dengan menggunakan uji statistik ANOVA dan dibandingkan dengan persyaratan yang telah disepakati perusahaan.



Cara kerja



Persiapan



Pembuatan Larutan Dithizon



Dithizon ditimbang sebanyak 0,0100 g kedalam gelas ukur 25 mL. Toluen ditambahkan sebanyak 10 mL. Setelah diaduk menggunakan batang pengaduk, larutan dithizon dibiarkan selama 3 menit. Lalu larutan dithizon kemudan di saring dan dimasukan kedalam botol vial. Larutan dithizon tersebut dimasukan sedikit demi sedikit kedalam gelas ukur 150mL yang berisi 120 mL toluen. Lalu diukur menggunakan spektrofotometri sinar tampak dengan panjang gelombang 620 nm. Larutan ditizhon dapat digunakan jika absorbansinya dalam rentang 0,855-0,920.



20



Pembuatan Natrium Asetat 2M



Natrium Asetat (CH3COONa. 3 H2O) ditimbang sebanyak 136,09 g ke dalam gelas ukur 1 L dan dilarutkan dengan 500mL air murni.



Pembuatan Standar Thimerosal 0,01%



Sebanyak 0,10000 g thimerosal ditimbang tepat, lalu dimasukan kedalam labu takar 100 mL, dilarutkan dan ditera dengan ari murni, kemudian dihomogenkan. Sebanyak 10 mL larutan thimerosal tersebut dipipet dan dimasukkan kedalam labu takar 100 mL, lalu dilarutkan dan ditera dengan air murni, kemudian dihomogenkan.



Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan Konvensional



Sembilan buah corong pemisah disiapkan dan diberi label Blanko, Standar 1, Standar 2, Sampel 1 , Sampel 2, Sampel 4, Sampel 5, dan Sampel 6. Sebanyak 4mL Asam klorida dipipet dan ditambahkan kedalam masing-masing corong pemisah. Air murni dimasukan kedalam corong pemisah bertanda blanko sebanyak 1 mL dan kedalam corong pemisah bertanda Standar 2 sebanyak 500 𝜇𝐿. Larutan thimerosal 0,0012% dimasukan kedalam corong pemisah standar 1 sebanyak 1mL dan kedalam corong pemisah standar 2 dimasukan thimerosal 0,012% sebanyak 500 𝜇𝐿. Contoh uji vaksin pentabio dimasukan kedalam masing-masing corong pemisah sebanyak 1 mL. Semua corong pemisah lalu di kocok hingga homogen. Natrium asetat 2M sebanyak 5 mL dan 5 mL titriplex III (EDTA) 0,01 M ditambahkan kedalam masing-masing corong pemisah dan dikocok dengan baik sampai homogen. Ammonium tiosianat jenuh ditambahkan kedalam masing-masing corong pemisah sebanyak 2 tetes dan dikocok dengan baik sampai homogen. Larutan ditizon



21



encer yang telah dibuat kemudian ditambahkan sebanyak 10 mL. Setelah itu diekstraksi selama satu menit secara konvensional. Setelah terbentuk dua lapisan, lapisan bagian bawah dibuang dan lapisan atas di tampung kedalam tabung reaksi. Kemudian masing-masing lapisan yang sudah ditampung kedalam tabung reaksi tersebut di ukur absorbansinya dengan spektrofotometer dalam panjang gelombang 620 nm. Kadar thimerosal bisa dihitung dengan rumus:



%(% 𝑏⁄𝑣 ) =



𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑐𝑜𝑛𝑡𝑜ℎ × 𝐶𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟



Keterangan:



% = Kadar Thimerosal (% 𝑏⁄𝑣 ) A = Absorbansi (mg/L) C = Konsentrasi Standar (%)



Perhitungan kadar dilakukan berdasarkan masing-masing standar, yaitu standar1 (thimerosal 0,012%) dan standar 2 (thimerosal 0,006%) yang lalu hasil keduanya di rata-ratakan sebagai hasil analisis. Untuk perhitungan akurasi, standar thimerosal 0,01% digunakan sebagai sampel.



Penetapan Kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder



Tahap preparasi dilakukan sama persis dengan penetapan kadar thimerosal dengan pengocokan konvensional. Tetapi pengocokan dilakukan dengan alat Separatory Funnel Holder dengan skala 70 rpm, 80 rpm, dan 90 rpm.



22



Setelah terbentuk dua lapisan, lapisan bagian bawah dibuang dan lapisan atas di tampung kedalam tabung reaksi. Kemudian masing-masing lapisan yang ditampung tersebut di ukur absorbansinya dengan spektrofotometer dalam panjang gelombang 620 nm. Kadar thimerosal bisa dihitung dengan rumus:



%(% 𝑏⁄𝑣 ) =



𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑐𝑜𝑛𝑡𝑜ℎ × 𝐶𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟 𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘𝑜 − 𝐴𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟



Keterangan: % = Kadar Thimerosal (% 𝑏⁄𝑣 ) A = Absorbansi (mg/L) C = Konsentrasi Standar (%)



Perhitungan kadar dilakukan berdasarkan masing-masing standar, yaitu standar1 (thimerosal 0,012%) dan standar 2 (thimerosal 0,006%) yang lalu hasil keduanya di rata-ratakan sebagai hasil analisis. Untuk perhitungan akurasi, standar thimerosal 0,01% digunakan sebagai sampel.



Pengolahan Data



Pengolahan data dilakukan dengan membandingkan hasil penetapan kadar thimerosal dalam vaksin secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik pengocokan konvensional dan pengocokan menggunakan alat Separatory Funnel Holder. Data yang diperoleh dari hasil analisis dibandingkan dengan menggunakan uji statistik menggunakan tabel ANOVA yang hasilnya dibandingkan dengan persyaratan perusahaan yang mengacu pada peraturan WHO (World Health Organization).



HASIL DAN PEMBAHASAN



Parameter yang diujikan adalah penentuan presisi dan akurasi pada standar thimerosal 0,01% dan perbandingan hasil penetapan kadar thimerosal dalam vaksin secara konvensional dengan hasil penetapan kadar thimerosal dengan Separatory Funnel Holder. Data yang diperoleh di hitung kadarnya menurut standar 0,012% dan standar 0,006% yang lalu masing-masing hasilnya di rata-ratakan. Hasil analisis berupa ratarata kadar thimerosal dari masing-masing metode tersebut dibandingkan dengan menggunakan uji statistik ANOVA. Hasilnya dibandingkan dengan persyaratan perusahaan yang mengacu pada peraturan WHO (World Health Organization).



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional



Hasil perhitungan penetapan kadar Thimerosal secara konvensional dapat dilihat pada Tabel 3. Tabel 3. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan Konvensional Konsentrasi Hasil I (%b/v) Pentabio -1 0,0081 Pentabio -2 0,0081 Pentabio -3 0,0082 Pentabio -4 0,0079 Pentabio -5 0,0082 Pentabio -6 0,0082 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II Sampel



Konsentrasi Hasil II (%b/v) 0,0062 0,0062 0,0062 0,0060 0,0063 0,0062



Konsentrasi Ratarata (%b/v) 0,0072 0,0072 0,0072 0,0070 0,0072 0,0072



Berdasarkan Tabel 3, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi konvensional dari data dan perhitungan di Lampiran 1, konsentrasi yang didapat



23



24



untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0079% sampai 0,0082%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0060% sampai 0,0063%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0070% sampai 0,0072%. Hasil penetapan kadar Thimerosal dengan ekstraksi manual tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0002%. Kadar standar yang didapat juga dapat diterima karena masih mendekati kadar teoritis yaitu sebesar 0,01%.



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm



Hasil



perhitungan



penetapan kadar



Thimerosal



dengan pengocokan



konvensional dapat dilihat pada Tabel 4.



Tabel 4. Data Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm Konsentrasi Hasil I (%b/v) Pentabio -1 0,0072 Pentabio -2 0,0073 Pentabio -3 0,0072 Pentabio -4 0,0073 Pentabio -5 0,0073 Pentabio -6 0,0073 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II Sampel



Konsentrasi Hasil II (%b/v) 0,0071 0,0071 0,0071 0,0071 0,0072 0,0072



Konsentrasi Ratarata (%b/v) 0,0071 0,0072 0,0072 0,0072 0,0073 0,0072



Berdasarkan Tabel 4, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm dari data dan perhitungan di Lampiran 2, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0072% sampai 0,0073%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0071% sampai 0,0072%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh



25



berkisar 0,0071% sampai 0,0073%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0002%.



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm



Hasil penetapan kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm dapat dilihat pada Tabel 5.



Tabel 5. Data Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm



Konsentrasi Hasil I (%b/v) Pentabio -1 0,0074 Pentabio -2 0,0074 Pentabio -3 0,0074 Pentabio -4 0,0075 Pentabio -5 0,0076 Pentabio -6 0,0075 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II Sampel



Konsentrasi Hasil II (%b/v) 0,0070 0,0070 0,0070 0,0071 0,0072 0,0071



Konsentrasi Ratarata (%b/v) 0,0072 0,0072 0,0072 0,0073 0,0074 0,0073



Berdasarkan Tabel 5, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm dari data dan perhitungan di Lampiran 3, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0074% sampai 0,0076%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0070% sampai 0,0072%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0072% sampai 0,0074%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0002%.



26



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm



Hasil penetapan kadar Thimerosal dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm dapat dilihat pada Tabel 6.



Tabel 6. Data Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm



Konsentrasi Hasil I (%b/v) Pentabio -1 0,0072 Pentabio -2 0,0072 Pentabio -3 0,0072 Pentabio -4 0,0074 Pentabio -5 0,0073 Pentabio -6 0,0074 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II Sampel



Konsentrasi Hasil II (%b/v) 0,0071 0,0071 0,0071 0,0072 0,0071 0,0072



Konsentrasi Ratarata (%b/v) 0,0072 0,0072 0,0072 0,0073 0,0072 0,0073



Berdasarkan Tabel 6, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm dari data dan perhitungan di Lampiran 4, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0072% sampai 0,0074%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0071% sampai 0,0072%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0072% sampai 0,0073%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0001%. Hal ini menunjukkan bahwa semua data dapat diterima dan sesuai spesifikasi perusahaan. Baik hasil uji dari metode dengan pengocokan konvensional, ataupun menggunakan alat Separatory Funnel Holder pada skala 70 rpm, 80 rpm, dan 90 rpm.



27



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% secara konvensional



Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan pengocokan secara konvensional dan perhitungan akurasi dapat dilihat pada Tabel 7.



Tabel 7. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan Konvensional



Sampel



Konsentrasi Hasil I (%b/v)



Konsentrasi Hasil II (%b/v)



Thimerosal -1 0,0099 Thimerosal -2 0,0100 Thimerosal -3 0,0100 Thimerosal -4 0,0100 Thimerosal -5 0,0100 Thimerosal -6 0,0100 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II %Recovery : (90-110)% Koevisien Variasi : < 5%



0,0095 0,0096 0,0096 0,0096 0,0096 0,0096



Konsentrasi Ratarata (%b/v) 0,0097 0,0098 0,0098 0,0098 0,0098 0,0098



Rerata Standar Deviasi Koefisien Variasi



%Recovery



97,21 98,45 98,06 97,82 97,85 98,10 97,92 0,378 0,39



Berdasarkan Tabel 8, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi konvensional dari data dan perhitungan di Lampiran 1, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0099% sampai 0,0100%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0095% sampai 0,0096%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0097% sampai 0,0098%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0001%. Kadar standar yang didapat juga dapat diterima karena masih mendekati kadar teoritis yaitu sebesar 0,01%. Pada penetapan kadar thimerosal dengan pengocokan manual, semua data memiliki presentase perolehan kembali pada rentang 90-110%.



Peresentase



perolehan kembali yang didapat standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 97,92%. Koefisien variasi yang didapatkan juga memiliki nilai kurang dari 5%. Koefisien



28



variasi yang didapat untuk standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 0,39%. Oleh karena itu, semua data dinyatakan memenuhi persyaratan.



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm



Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm dan perhitungan akurasi dapat dilihat pada Tabel 8.



Tabel 8. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm



Sampel



Konsentrasi Hasil I (%b/v)



Konsentrasi Hasil II (%b/v)



Thimerosal -1 0,0099 0,0092 Thimerosal -2 0,0099 0,0093 Thimerosal -3 0,0099 0,0093 Thimerosal -4 0,0098 0,0092 Thimerosal -5 0,0099 0,0093 Thimerosal -6 0,0099 0,0093 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II %Recovery : (90-110)% Koevisien Variasi : < 5%



Konsentrasi Ratarata (%b/v)



%Recovery



0,0096 0,0096 0,0096 0,0095 0,0096 0,0096 Rerata Standar Deviasi Koefisien Variasi



95,53 95,94 96,02 94,83 95,98 95,87 95,69 0,420 0,44



Berdasarkan Tabel 8, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi konvensional dari data dan perhitungan di Lampiran 2, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0098% sampai 0,0099%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0092% sampai 0,0093%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0095% sampai 0,0096%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang



29



nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0001%. Kadar standar yang didapat juga dapat diterima karena masih mendekati kadar teoritis yaitu sebesar 0,01%. Pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder pada skala 70, semua data memiliki peresentase perolehan kembali pada rentang 90-110%. Peresentase perolehan kembali yang didapat untuk standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 95,69%.



Koefisien variasi yang



didapatkan juga memiliki nilai kurang dari 5%. Koefisien variasi yang didapat untuk penetapan standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 0,44%. Oleh karena itu, semua data dinyatakan memenuhi persyaratan.



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm



Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm dan perhitungan akurasi dapat dilihat pada Tabel 9.



Tabel 9. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm



Sampel



Konsentrasi Hasil I (%b/v)



Konsentrasi Hasil II (%b/v)



0,0098 0,0095 0,0099 0,0095 0,0100 0,0097 0,0100 0,0097 0,0100 0,0096 0,0098 0,0095 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II %Recovery : (90-110)% Koevisien Variasi : < 5% Thimerosal -1 Thimerosal -2 Thimerosal -3 Thimerosal -4 Thimerosal -5 Thimerosal -6



Konsentrasi Ratarata (%b/v)



%Recovery



0,0096 0,0097 0,0098 0,0098 0,0098 0,0096 Rerata Standar Deviasi



96,24 96,91 98,38 98,27 98,05 96,40 97,38 0,886



Koefisien Variasi



0,91



30



Berdasarkan Tabel 9, pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi konvensional dari data dan perhitungan di Lampiran 3, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0098% sampai 0,0100%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0095% sampai 0,0097%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0096% sampai 0,0098%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0002%. Pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder pada skala 80, semua data memiliki peresentase perolehan kembali pada rentang 90-110%. Peresentase perolehan kembali yang didapat untuk untuk standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 97,38%. Koefisien variasi yang didapatkan juga memiliki nilai kurang dari 5%. Koefisien variasi yang didapat untuk standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 0,91%.



Oleh karena itu, semua data



dinyatakan memenuhi persyaratan.



Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm



Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Standar Thimerosal 0,01% dengan pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm dan perhitungan akurasi dapat dilihat pada Tabel 10. Pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi konvensional dari data dan perhitungan di Lampiran 4, konsentrasi yang didapat untuk sampel Pentabio berdasarkan standar I adalah 0,0098% sampai 0,0100%. Sedangkan konsentrasi yang didapat berdasarkan standar II adalah 0,0095% sampai 0,0098%. Rata-rata konsentrasi yang diperoleh berkisar 0,0096% sampai 0,0099%. Hasil penetapan kadar Thimerosal tersebut dapat diterima karena memiliki rentang nilai yang tidak terlalu besar, yaitu ±0,0003%.



31



Tabel 10. Data Hasil Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder skala 90 rpm



Sampel



Konsentrasi Hasil I (%b/v)



Konsentrasi Hasil II (%b/v)



0,0098 0,0096 0,0100 0,0098 0,0099 0,0097 0,0099 0,0097 0,0097 0,0095 0,0098 0,0096 Hasil I : Berdasarkan standar I Hasil II : Berdasarkan standar II %Recovery : (90-110)% Koevisien Variasi : < 5% Thimerosal -1 Thimerosal -2 Thimerosal -3 Thimerosal -4 Thimerosal -5 Thimerosal -6



Konsentrasi Ratarata (%b/v)



%Recovery



0,0097 0,0099 0,0098 0,0098 0,0096 0,0097 Rerata Standar Deviasi



96,78 98,58 97,58 97,81 96,21 96,81 97,29 0,782



Koefisien Variasi



0,80



Pada penetapan kadar thimerosal dengan ekstraksi menggunakan alat Separatory Funnel Holder pada skala 90, semua data memiliki peresentase perolehan kembali pada rentang 90-110%. Peresentase perolehan kembali yang didapat untuk penetapan standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 97,29%. Koefisien variasi yang didapatkan juga memiliki nilai kurang dari 5%. Koefisien variasi yang didapat untuk standar thimerosal 0,001% adalah sebesar 0,80%.



Oleh karena itu, semua data



dinyatakan memenuhi persyaratan.



Perbandingan Hasil Uji Penetapan Kadar Thimerosal dalam Vaksin Pentabio dengan Pengocokan konvensional dan menggunakan Alat Separatory Funnel Holder



Hasil perhitungan statistik perbandingan hasil uji kadar thimerosal dengan pengocokan konvensional dan menggunakan alat Separatory Funnel Holder dengan tabel ANOVA pada penetapan kadar Thimerosal dapat dilihat pada Tabel 11.



32



Tabel 11. Hasil perhitungan statistik menggunakan tabel ANOVA Sampel



Skala 70 rpm P-Value F-hitung



Vaksin 0,360 Pentabio Standar Thimerosal 5,014×10-6 0,01% Syarat Keberterimaan:



Skala 80 rpm P-Value F-hitung



Skala 90 rpm P-Value F-hitung



0,922



0,082



3,744



0,238



1,571



77,605



0,238



1,577



0,140



2,573



P-Value > α (0,05) Fhitung < Ftabel (4,965)



Berdasarkan tabel 12, pada penetapan kadar thimerosal pada vaksin Pentabio menggunakan alat Separatory Funnel Holder skala 70 rpm, 80 rpm dan 90 rpm dengan pengocokan konvensional tidak berbeda nyata. Pada penetapan kadar thimerosal pada standar thimerosal 0,01% menggunakana alat Separatory Funnel Holder skala 80 rpm dan 90 rpm dengan pengocokan konvensional tidak berbeda nyata, sedangkan pada skala 70 rpm berbeda nyata. Hal tersebut dapat dilihat dari P-Value yang didapat dari perbandingan hasil uji konvensional dengan skala 80 dan 90 lebih besar dari α, dimana Alpha yang digunakan adalah 0,05. Fhitung yang didapat dari perhitungan juga lebih kecil dari F tabel, dimana Ftabel yang didapatkan adalah 4,96. Dengan demikian kedua metode tersebut tidak berbeda nyata pada skala 80 dan 90. Sedangkan pada skala 70, kedua metode tersebut berbeda nyata. Dimana P-Value yang didapat dari perbandingan hasil uji lebih kecil dari α, dan Fhitung yang didapat dari juga lebih kecil dar Ftabel. Hal ini menunjukkan bahwa pada skala 70, ekstraksi belum sempurna. Sehingga untuk pengujian rutin, lebih baik menggunakan skala 80 rpm dan 90 rpm.



33



KESIMPULAN



Berdasarkan perbandingan hasil penetapan kadar thimerosal dalam vaksin secara spektrofotometri sinar tampak menggunakan teknik preparasi secara konvensional dan preparasi dengan Separatory Funnel Holder pada skala 80 rpm dan 90 rpm tidak berbeda nyata, sedangkan pengocokan dengan alat Separatory Funnel Holder pada skala 70 rpm dengan pengocokan konvensional berbeda nyata. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa kedua metode tersebut tidak berbeda nyata. Akan tetapi, skala 70 rpm tidak dianjurkan untuk penetapan kadar thimerosal dalam vaksin.



DAFTAR PUSTAKA



BIO FARMA. 1997. Vademekum Virus, Sera, Infus, dan Diagnostika laboratorium. PT. Bio Farma. Bandung. BRITISH PHARMACOPOEIA. 2001. The Stationery Office Crown Copyright. London. CRISTIAN,G.D. 1994. Analytical Chemistry 5th edition. John Wiley and Son Inc. NewYork. DAY, R. A. DAN A. L. UNDERWOOD. 1999. Analisis Kimia Kuantitatif. Edisi kelima. Erlangga. Jakarta. FRITZ . 1978. Test on Organik Analysis 6th Edition. William and Brown Co. NewYork. GHOZALI, I . 2009. Aplikasi Analisis Multivariate dengan ANOVA. UNDIP. Semarang INAYAH, N dan DONI. 2014. Vaksin dan Vaksinasi. PT. Temptina Media Grafika: Surabaya. JACONINI, D. 1972. Preservatives in Pharmaceutical Product. Dalam M. S. Cooper: Quality Control in Pharmaceutical Industry. Vol. 1. Academic Press: London. HERLIANA, LINA. 2001. Dasar – Dasar Formulasi. Erlangga: Jakarta. KASMIYATUN, M dan BAKTI, JOS. 2008. Destruksi Asam Sitrat dan Asam Oksalat: Pengaruh Trioctylamine Sebagai Extracting Power dalam berbagai solven Campuran Terhadap Kejadian Dekstruksi. Reaktor 12 : 107:116. KHOPKAR, S. M. 2003. Konsep Dasar Kimia Analitik. UI Press : Jakarta. PHARMACOPOEIA EUROPEAN. 2012. European Pharmacopoeia. Seventh Edition. Council of Europe. Philadephia. RAHAYU, SS. 2009. Pengukuran pH. http://www.chem-is-try.org/materi_kimiaindustri/instrumentasi-dan-pengukuran/pengukuran-pH/. RIVM. 1999. Rijks van Volkgezsonheid en Milieu, Chemical Testing: Thimerosal Determination. International Course on Quality Control of DTP Vaccines. Hal 114-117. ROHMAN, A dan SUMANTRI. 2007. Analisis Makanan. UGM. Yogyakarta.



34



35



SILALAHI, T. 2009. Thimerosal dalam Vaksin. Regulatory Lead Mosanto Ind. Tumpal. [email protected] : 17 : 6. VTTC. 1998. Quality Control of DTP Vaccines.World Health Organization. WHO. 1990. WHO Technical Report Series 800. Fortieth Report. WHO Expert Commitee on Biological Standardization. Geneva: Switzerland. WHO. Manual Detail of Test Required on Final Vaccines Used In The WHO Expanded Program of Immunization. BLG/UNDP/82.1 Hal 23.