Rumus Pengeceran Primer [PDF]

Citation preview

PENGECERAN PRIMER



catatan bahwa satuan (uM = pmol/ul)



Membuat Stock Solution untuk perhitungan pengenceran primer, sbb: misalkan tabung yang berisi 50 nmoles lyophilized primer ( tertulis dalam COA) tabung yang berisi 50 nmoles + 500 ul DNAse/RNAse free water atau TE buffer sehingga tercapai 100 uM. ini disebut Stock Solution. Membuat work Solution maka: Cara Pengenceran Primer (uM = pmol/ul) 1. Kebutuhan primer 10uM untuk working solution primer : a. Misalnya memiliki stok 321 ul primer dengan konsentrasi 100uM vortek sampai merata b. Buat working primer (10 uM/ul) dengan cara : c. 90 ul Ultrapure Water + 10 ul dari konsentrai 100uM vortek sampai merata, sehingga memiliki 100ul primer dengan konsentrasi 10uM Gunakan Rumus V1M1 = V2M2 untuk menghitung final concentration primer dalam satu reaksi PCR , Misalnya final concentration 0,2uM primer forward dengan total volume reaksi adalah 50ul maka : 10uM(working solution) X ul = 0.2uM X 50ul (final volume rekasi PCR nya) Ambil 1 ul primer dari 10uM/reaksi working solution primer 2.



Kebutuhan primer 20uM untuk working solution primer : a. Misalnya memiliki stok 321 ul primer dengan konsentrasi 100uM vortek sampai merata b. Buat working primer (20 uM/ul) dengan cara : c. 80 ul Ultrapure Water + 20 ul dari konsentrai 100uM vortek sampai merata sehingga memiliki 100uM primer dengan konsentrasi 10uM



Gunakan Rumus V1M1 = V2M2 untuk menghitung final concentration primer dalam satu reaksi PCR , Misalnya final concentration 0,2uM primer forward dengan total volume reaksi adalah 50ul maka : 20uM(working solution) X ul = 0.2uM X 50ul (final volume rekasi PCR nya) Ambil 0.5 ul primer dari 10uM/reaksi working solution primer Ambil 0,5 ul untuk penggunaan primer 20uM/reaksi dari working primer