Laboratorium Patologi Anatomi (AutoRecovered) [PDF]

Citation preview

LABORATORIUM PATOLOGI ANATOMI



Pelayanan Patologi Anatomik adalah pelayanan yang dilakukan untuk menegakkan diagnosis dari suatu penyakit, melalui pemeriksaan jaringan/ sel yang diperoleh dari tindakan biopsi/ operasi secara makroskopik dan mikroskopik. A. Jenis pemeriksaan Patologi Anatomi a. Histopatologi Merupakan cabang ilmu patologi anatomi yang melihat perubahan jaringan secara lengkap dan berperan dalam menentukan diagnosis melalui gambaran mikroskopik dan makroskopik dari spesimen yang berasal dari tubuh manusia. Pulasan dalam histopatologi adalah hematoksilin-eosin b. Sitopatologi Meruapakan cabang ilmu patologi anatomi yang berperan dalam skrinning dan penegakan diagnosis di tingkatan sel, dengan spesimen yang berasal dari eksfoliasi sel ( pap smear, bilasan, sikatan), hasil aspirasi dan cairan diapuskan pada kaca benda dan dipulas dengan pulasan Papanicolau atau giemsa c. Histokimia Merupakan salah satu pemrosesan laboratorium pada layanan Patologi Anatomi yang berperan membantu penegakkan diagnosis suatu penyakit dengan cara berbagai pulasan yang berbasis reaksi kimia dalam jaringan untuk menentukan kandungan jenis senyawa kimia dalam sel dan jaringan. d. Imunohistokimia Merupakan cabang ilmu Patologi Anatomi dalam menegakkan diagnosis suatu penyakit dengan menggunakan metode deteksi protein dari sel/ jaringan, melalui teknik imunoflourensi, imunohistokimia dan imunositikimia.



e. Patologi Molekuler Merupakan pemeriksaan yang berperan dalam menentukan diagnosis suatu penyakit dalam tingkatan gen yang berasal dari sel, jaringan ataupun cairan tubuh melalui teknik hibridasi in situ dan sekuensi genetik. f. Biopsi Jarum Halus Pemeriksaan skrinning dan diagnostik dengan cara melakukan aspirasi menggunakan jarum halus untuk organ permukaan. g. Potong beku Pemeriksaan untuk menegakkan diagnosis cepat ataupun arahan pemeriksaan sediaan jaringan, organ atau bagian tubuh manusia yang dilakukan secara cepat melalui proses potong beku, dalam kondisi pasien masih di meja operasi h. Autopsi Klinik Melakukan tindakan bedah mayat seorang pasien atas permintaan klinisi untuk menentukan, klarifikasi atau konfirmasi diagnosis/ penyebab kematian pasien yang belum jelas atau belum diketahui secara pasti diagnosis medisnya. B. Laboratorium Patologi Anatomi RSUD dr. Loekmono Hadi Laboratorium Patologi Anatomi RSUD dr. Loekmono Hadi terletak di lantai 2 dari unit instalasi laboratorium. Pemeriksaan yang dilakukan di Laboratorium ini yaitu Histologi, Sitologi dan Fine Needle Aspiration Biopsy ( FNAB) / Biopsi



Jarum



Halus.



Pada



laboratorium



Patologi



Anatomi



RSUD



dr.Loekmono Hadi terdapat unit administrasi di bagian luar yang bertugas untuk pencatatan sampel, sedangkan di bagian dalam terdapat unit ruang pemotongan jaringan ( berupa ruang bersekat yang terdapat



alat tissue



proccesor, dimana sampel baik berupa organ ataupun cairan akan diidentifikasi secara makroskopis). Selain ruang pemotongan sampel terdapat pula ruang processing dan pewarnaan ( berupa ruangan yang dilengkapi dengan alat diantaranya Embedding station, Microtom, Waterbath, Hot Plate dan set pewarnaan jaringan).



C. Alat dan Bahan -



Pemeriksaan Histologi Alat



Bahan



Tissue processor



Sampel



Embeding station



Buffer formalin



Microtom



Xylol



Hot plate



Alkohol 70 %, Alkohol 80 %, Alkohol 96 % dan Alkohol 100 %



Waterbath



Parafin



Bak pengecatan



Cat Hematoxylin Cat Eosin



Pinset



Air



Objek glass



Entelan



Penggaris Timer Deck glass Kaset



-



Pemeriksaan Sitologi Alat



Bahan



Tabung reaksi



Sampel



Centrifuge



Methanol



Mikropipet



Giemsa



Objek glass



Alkohol 70 %, Alkohol 80 %, Alkohol 96 %, Alkohol 100 %



Deck glass



Xylol



Bak pengecatan



Entelan



tip mikropipet



Larutan Orange G-6 Larutan EA Larutan Hematoxylin



1. Pemeriksaan Histologi a. Pra Analitik -



Penerimaan Jaringan



Jaringan yang diterima oleh petugas untuk pemeriksaan histologi adalah jaringan yang diperoleh dengan biopsi insisi/ eksisi nekropsi atau aspirasi yang berasal dari sampel pasien dari instalasi bedah sentral ( IBS) yang telah dilengkapi dengan blanko pemeriksaan. Sampel difiksasi dalam cairan formalin buffer 10 % dan ditutup dengan rapat dalam suatu wadah. Perbandingan jaringan dengan cairan fiksasi adalah 1 : 9. Pada Blanko formulir harus ada keterangan nama pasien, tanggal lahir, jenis kelamin, No. CM, diagnosa klinis, lokasi pengambilan jaringan, tanggal pengambilan dan nama dokter pengirim. Untuk sampel rawat jalan sampel diserahkan ke petugas administrasi laborotarium dan dilakukan registrasi oleh petugas. -



Sampel yang telah diterima kemudian diberi kode sampel di bagian administrasi laboratorium patologi anatomi



-



Jaringan dikeluarkan dari wadah ( harus dekat dengan kran/ air mengalir)



-



Melakukan identifikasi makroskopis di ruang pemotongan jaringan meliputi Ukuran, bentuk, warna dan konsistensi oleh dokter PA dan dicatat pada formulir oleh petugas laboratorium



b. Analitik



-



Melakukan pemotongan jaringan mentah dengan ukuran 0,2 – 0,3 cm



-



Jaringan yang telah dipotong kemudian dimasukan dalam kaset yang telah diberi identitas



-



Memasukkan kaset ke dalam keranjang dan dimasukkan dalam tissue processor dengan menekan tombol ↑ pada display alat



-



Menekan tombol↓ pada display untuk menurunkan kaca penutup, kemudian tekan tombol START sebanyak 2 kali lalu tekan tembol Lock.



-



Jaringan dalam kaset akan otomatis di proses dalam tissue processor dengan durasi waktu 18 jam. 1. Fiksasi Fiksasi berfungsi untuk mempertahankan struktur sel sehingga menjadi stabil secara fisik dan kimiawi dan mencegah terjadinya dialisis atau pembengkakan pada ruptur. Botol 1. Buffer neutral formalin 10 %



2 jam



2. Dehidrasi Dehidrasi berfungsi untuk menghilangkan kadar air dalam jaringan dimulai dengan konsentrasi rendah sampai konsentrasi tinggi. Untuk dehidrasi yang baik sebaiknya memakai alkohol 70 % sampai 100 %. Botol 2. Alkohol 70 %



1,5 jam



Botol 3. Alkohol 80 %



1,5 jam



Botol 4. Alkohol 96 %



1,5 jam



Botol 5. Alkohol Absolut I



1 jam



Botol 6. Alkohol Absolut II



1,5 jam



Botol 7. Alkohol Absolut III



2 jam



3. Clearing



Clearing berfungsi untuk menarik keluar kadar alkohol yang berada dalam jaringan dan memberikan warna yang bening pada jaringan. Botol 8. Xylol I



1 jam



Botol 9. Xylol II



1,5 jam



Botol 10. Xylol III



1,5 jam



4. Infiltrasi parafin Infiltrasi parafin menggunakan parafin cair bersuhu 57-59°C. Tahap ini berfungsi untuk mengisi rongga - rongga atau pori yang ada pada jaringan setelah ditinggalkan oleh cairan sebelumnya ( xylol).



-



Botol 11. Parafin cair I



1,5 jam



Botol 12. Parafin cair II



2 jam



Pengeblokan Jaringan yang telah selesai tahap processing kemudian dilakukan pengeblokan menggunakan alat embeding station. a. Meletakkan kaset jaringan ke dalam sisi panas embeding set b. Mengambil cetakan kemudian menuang parafin dengan menekan tuas secara otomatis parafin akan keluar ( pengisian parafin diusahakan tidak terisi penuh pada cetakan) c. Mengambil jaringan dan dimasukan dalam cetakan menggunakan pinset kemudian jaringan ditata. d. Menuang parafin kembali hingga volume penuh dan tutup cetakan kemudian letakan blok jaringan pada sisi dingin alat hingga blok membeku secara sempurna.



-



Pemotongan



Pemotongan blok jaringan dilakukan menggunakan mikrotom putar dengan langkah sebagai berikut : a. Memasang



pisau



mikrotom



dengan



posisi



handwheel terkunci b. Memasang blok pada tempat blok mikrotom. c. Menyesuaikan blok jaringan dengan jangkauan posisi pisau mikrotom dengan memutar tombol disamping mikrotom. d. Menekan



tombol



trim



untuk



menghilangkan



kelebihan parafin di atas spesimen ( ketebalan 10 – 30 μm) e. Menekan tombol mode feed untuk melakukan pemotongan jaringan dengan ketebalan 1 – 5 μm. f. Meletakkan pita jaringan yang didapat dengan cara diayunkan ke dalam waterbath hingga posisi pita terentang dengan sempurna kemudian tempelkan menggunakan objek glass g. Meletakkan hasil potongan jaringan dalam suhu ruang selama 15 menit. -



Inkubasi Inkubasi berfungsi untuk menguapkan kadar air yang terbawa oleh hasil potongan sehingga jaringan menempel kuat pada objek glass. Preparat diinkubasi diatas hot plate dengan suhu 58 ° C selama 15 menit .



-



Pengecatan Cat yang digunakan adalah Hematoxylin Eosin ( HE). 1. Deparafinisasi



Berfungsi untuk melarutkan parafin yang ada pada preparat 2. Rehidrasi Berfungsi melarutkan xylol yang terbawa oleh preparat dan memasukkan kadar air dalam jaringan dengan cara bertahap. 3. Air Mengalir Berfungsi melarutkan sisa cat atau cairan yang terbawa sebelumnya 4. Hematoksilin Berfungsi memberikan warna biru pada inti sel 5. Eosin ( Counter Stain ) Berfungsi



memberikan



warna



merah



pada



sitoplasma, jaringan ikat dan lainya 6. Dehidrasi Berfungsi melepaskan air yang terbawa oleh preparat. 7. Clearing Berfungsi melarutkan sisa alkohol yang terbawa oleh preparat dan juga memberikan warna yang bening terhadap jaringan. Alur pengecatan menggunakan cat Hematoxylin Eosin. - Prosedur pengecatan menggunakan Hematoxylin Eosin a. Mencelupkan dalam Xylol I, II, III masingmasing selama 5 menit



b. Mencelupkan



dalam



Alkohol



100



%,



Alkohol 96 %, 80 % dan 70 % masing – masing selama 3 menit. c. Mengaliri



preparat



menggunakan



air



mengalir selama 3 menit d. Memasukkan preparat dalam cat HE selama 10 menit e. Mengaliri preparat



dalam air mengalir



selama 3 menit f. Memasukkan preparat dalam Eosin selama 3 menit g. Mencelupkan dalam Air tap I, II, III masingmasing selama 3 celup h. Mencelupkan dalam Alkohol 70 %, Alkohol 80 %, Alkohol 96 % serta Alkohol 100 % masing-masing 3 celup i. Mencelupkan dalam Xylol selama 5 menit j. Meneteskan



entelan



secukupnya



pada



preparat dan tutup dengan deck glass k. Memberi label pada bagian atas preparat c. Tahap Pasca Analitik -



Preparat yang telah diberi identitas kemudian diserahkan pada dokter spesialis patologi anatomi untuk dilakukan pembacaan menggunakan mikroskop



-



Hasil pemeriksaan yang telah dilakukan akan diketik oleh petugas administrasi, dan kemudian dicetak untuk diserahkan kepada pasien. Dimana untuk pasien rawat inap hasil pemeriksaan akan dikirimkan ke ruangan pasien sedangkan untuk pasien rawat jalan hasil dapat di ambil secara langsung ke bagian administrasi.



2. Pemeriksaan Sitologi Sampel yang termasuk dalam pemeriksaan sitologi cairan tubuh yaitu Acites, Cairan pleura, Sputum dan cairan peritonium. a. Pra Analitik -



Penerimaan Jaringan



Sampel cairan tubuh yang diterima oleh petugas untuk pemeriksaan sitologi berasal dari sampel pasien dari instalasi bedah sentral ( IBS) yang telah dilengkapi dengan blanko pemeriksaan. Pada Blanko formulir harus ada keterangan nama pasien, tanggal lahir, jenis kelamin, No. CM, diagnosa klinis, lokasi pengambilan jaringan, tanggal pengambilan dan nama dokter pengirim. Untuk sampel rawat jalan sampel diserahkan ke petugas administrasi laborotarium dan dilakukan registrasi oleh petugas. -



Sampel yang telah diterima kemudian diberi kode sampel di bagian administrasi laboratorium patologi anatomi



-



Melakukan identifikasi makroskopis di ruang pemotongan jaringan meliputi Volume, Kekeruhan, Warna, dan ada atau tidaknya jendalan oleh dokter PA dan dicatat pada formulir oleh petugas laboratorium



-



Sampel cairan yang telah diterima kemudian dimasukkan ke dalam tabung dan disentrifugasi 3000 rpm selama 10 menit



-



Mengambil endapan cairan sampel dalam tabung dan meneteskan di atas objek glass menggunakan mikropipet untuk kemudian dibuat hapusan



b. Analitik Pewarnaan pada pemeriksaan sitologi terbagi menjadi 2 yaitu : 1) Pewarnaan Giemsa -



Slide dikeringkan dengan cara diletakkan di depan aliran udara kipas angin



-



Menetesi preparat menggunakan methanol dan biarkan selama 2 menit



-



Menetesi pewarna giemsa pada preparat hapusan selama 15 menit



-



Membilas preparat menggunakan air mengalir



-



Menetesi dengan entelan dan ditutup menggunakan deck glass



-



Memberi label identitas pada bagian atas preparat



2) Pewarnaan Papanicolou -



Memfiksasi ke dalam Alkohol 96 % selama 5 – 30 menit



-



Mengaliri preparat menggunakan air mengalir selama 1 menit



-



Memasukkan preparat ke dalam cat HE selama 10 menit



-



Mengaliri preparat menggunakan air mengalir selama 1 menit



-



Mencelupkan ke dalam Alkohol 70 %, Alkohol 80 %, Alkohol 96 % masing – masing sebanyak 10 celup



-



Memasukkan preparat ke dalam larutan Orange G-6 selama 10 menit



-



Mencelupkan dalam Alkohol 96 % sebanyak 10 celup ( dilakukan 3 kali )



-



Memasukkan ke dalam larutan EA-50 selama 10 menit



-



Mencelupkan dalam Alkohol 96 % sebanyak 10 celup ( dilakukan 3 kali )



-



Mencelupkan dalam Alkohol 100 % sebanyak 10 celup ( dilakukan 2 kali )



-



Mengeringkan dengan cara diletakkan di depan aliran udara kipas angin



-



Mencelupkan ke dalam Xylol I selama 5 menit



-



Mencelupkan ke dalam Xylol II selama 5 menit



-



Menetesi dengan entelan dan ditutup menggunakan deck glass



-



Memberi label identitas pada bagian atas preparat



c. Pasca Analitik -



Preparat yang telah diberi identitas kemudian diserahkan pada dokter spesialis patologi anatomi untuk dilakukan pembacaan menggunakan mikroskop



-



Hasil pemeriksaan yang telah dilakukan akan diketik oleh petugas administrasi, dan kemudian dicetak untuk diserahkan kepada pasien. Dimana untuk pasien rawat inap hasil pemeriksaan akan dikirimkan ke ruangan pasien sedangkan untuk pasien rawat jalan hasil dapat di ambil secara langsung ke bagian administrasi.



3. Pemeriksaan Fine Needle Aspiration Biopsy ( Biopsi Jarum Halus) Pra Analitik -



Melakukan pengecekan riwayat pasien



-



Menentukan lokasi yang akan dibiopsi



-



Menjelaskan prosedur biopsi secara umum dan meminta persetujuan dari pasien, serta konfirmasi ulang lokasi aspirasi



-



Menanyakan tentang masalah medis yang signifikan termasuk gangguan perdarahan, antikoagulasi, atau komplikasi dari prosedur biopsi sebelumnya



-



Melakukan pemeriksaan fisik pada target / lokasi aspirasi



-



Dilakukan USG pada tempat yang akan diambil sampelnya



-



Dilakukan desinfeksi menggunakan kapas alkohol



-



Setelah ditemukan dokter PA kemudian melakukan penusukan menggunakan jarum suntik pada layar monitor akan terlihat apakah jarum sudah pada posisi tepat. Jarum digerakkan maju – mundur ( jarum tidak boleh keluar dari kulit selama proses ini



-



Ketika cairan telah muncul pada indictor, aspirasi harus dihentikan



-



Jarum suntik diambil kemudian pasang spuit dengan posisi plunger sudah



tertarik



agar



memberi



ruang



udara



untuk



proses



penyemprotan -



Semprotkan cairan pada objek glass lalu buat hapusan sebanyak 4 buah ( 2 untuk pengecatan giemsa dan 2 buah untuk pengecatan papanicolou)



-



Preparat hapusan dikeringkan sementara untuk pengecatan papanicolou preparat dimasukkan ke dalam alkohol 96 %.



-



Prosedur pengecatan Giemsa dan Papanicolou sama seperti pada pemeriksaan Sitologi



-