HbsAg Metode Elisa [PDF]

Citation preview

LAPORAN PRAKTIKUM VIROLOGI PEMERIKSAAN HbsAg Metode ELISA Disusun untuk memenuhi tugas mata kuliah Virologi Dosen pengampu : Roni Afriansya, S.T., M.Si.



Disusun oleh : Hanif Shaifa Risma P1337434119101



POLTEKKES KEMENKES SEMARANG JURUSAN ANALIS KESEHATAN DIII TEKNOLOGI LABORATORIUM MEDIK 2021



A. Judul Pemeriksaan HbsAg metode ELISA B. Hari/tanggal Rabu, 01 September 2021 C. Tujuan Untuk mengetahui cara pemeriksaan HbsAg metode Elisa dengan benar dan untuk mengetahui adanya antigen virus Hepatitis B Surface (HbsAg) dalam sampel serum pasien D. Metode Metode yang digunakan adalah Elisa (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) E. Prinsip Antibodi pada serum pasien akan berikatan dengan antigen yang berada pada kit F. Alat dan Bahan Alat 1. 96 – Well Plate 2. Mikropipet 3. Yellow tip dan blue tip 4. Tabung reaksi 5. Rak tabung reaksi Bahan 1. Substrat A 2. Substrat B 3. Positif dan negatif control 4. Wash solution 5. Stop solution 6. Conjugate 7. Serum pasien G. Cara Kerja 1. Siapkan Alat dan bahan yang akan digunakn 2. Well plate diisi dengan bagiannya masing masing, bagian A diisi aquadest, bagian B,C,D diisi control negative, bagaian E,F diisi control positive, dan bagian G,H diisi dengan serum.



3. Setelah diisi pada bagian masing-masing, bagian permukaan well plate ditutup dengan solasi kemudian diinkubasi selama 80 menit 4. Setelah diinkubasi lalu dicuci dengan wash solution yang telah diencerkan dengan menggunakan perbandingan 1:20 5. Masukkan 350 µl wash solution yang sudah diencerkan kedalam masingmasing well plate lalu inkubasi selama 1 menit 6. Ulangi langkah pencucian sampai 8 kali 7. Setelah itu ambil substrat A dan substrat B sebanyak 50 µl lalu masukkan kedalam masing-masing wheel 8. Tutup wheel dengan selotip kemudian diinkubasi selama 30 menit 9. Setelah diinkubasi tambahkan stop solutions sebanyak 100 µl kemudian baca pada ELISA Pembacaan ELISA Reader 1. Sambungkan alat pada arus listrik 2. Tekan “ON” untuk menghidupkan alat 3. Jika alat sudah menyala maka akan tampil layar kemudian di setting dengan memilih “program” dan pilih pemeriksaan yang akan dilakukan. 4. Atur panjang gelombang 1 dan 2 berdasarkan pemeriksaan dan manual kit yang akan digunakan dan atur mode kalibrasi menggunakan absorban dan pastikan di blank < 0,050. Kemudian pilih next. 5. Kemudian atur kualitatif dan setting positif dan negative lalu klik finish. 6. Setelah alat disetting, kemudian masukkan well-plate pada Elisa yang sudah terisi dengan sampel dan pastikan dalam posisi yang benar lalu tutup. 7. Kemudian periksa dan klik test 8. Atur plate direction dan pilih well-plate A sampai H, lalu atur mode test, dan kemudian atur mixer (kecepatan) 9. Untuk memilih pemeriksaan yang akan dilakukan/program yang telah dibuat, klik “NEW”. 10. Klik dimana saja peletakkan well pada plate. 11. Jika semuanya sudah, klik “start” maka alat akan bekerja dan hasil akan keluar secara otomatis pada layar monitor. 12. Jika ingin melihat hasil pemeriksaan, klik “report”, lalu “program”, “today” dan klik “ok”.



13. Apabula sudah selesai pemeriksaan matikan ELISA H. Interpretasi Hasil Hasil pemeriksaan valid 



Nilai OD blanko < 0,100







Nilai OD kontrol negatif harus sama atau < 0,100







Nilai OD lontrol positif sama atau > 0,500



Interpretasi hasil 



Spesimen dengan absorbansi kurang dari (