Isolasi Protein Kasein Dari Susu Sapi OK [PDF]

Citation preview

PERCOBAAN 3: ISOLASI KASEIN DARI SUSU 3.1. Kompetensi Yang Diharapkan Setelah mengikuti percobaan ini, mahasiswa diharapkan mampu mengisolasi protein berdasarkan titik isoelektriknya. 3.2. Dasar Teori Seperti halnya asam-amino, protein juga bersifat amfolit. Protein juga memiliki pH isoelektrik tertentu. Pada pH isoelektriknya protein tidak bermuatan sehingga dapat membentuk agregat dan mengendap. Sebagian besar protein menunjukan kelarutan minimal pada pH isoelektriknya. Sifat ini dapat digunakan untuk mengisolasi suatu protein. Kasein merupakan suatu fosfoprotein, dimana rantai samping pada residu serinnya membentuk ikatan ester dengan gugus fosfat. Kasein sering disebut sebagai protein susu karena merupakan komponen utama di dalam susu dengan konsentrasi sekitar 35 g/L. Kasein memiliki pH isoelektrik 4,7 dan bersifat tidak larut dalam etanol.



3.3. Alat dan Bahan 3.3.1. Alat: Gelas kimia 500 mL Hot plate Batang pengaduk Kertas saring Pipet tetes



Termometer 100oC pH meter/kertas lakmus universal skala 0,5 Corong kaca Gelas arloji Erlenmeyer 250 mL



3.3.2. Bahan 1. 2. 3. 4. 5. 6.



Susu Bufer asetat 0,2 M pH 4,7 HCl 0,2 M Etanol 95% Heksana Akuades



3.4. Cara Kerja 1. Ukur pH susu mengunakan kertas indikator universal. 2. Tempatkan 100 mL susu di dalam gelas kimia 500 mL, hangatkan hingga suhunya mencapai 40oC. 3. Tambahkan secara perlahan-lahan sambil diaduk 100 mL buffer asetat 0,2 M pH 4,7. 4. Atur pH campuran dengan HCl 0,2 M hingga mencapai pH = 4,7. Catatan: jika tidak tersedia pH meter, tambahkan setetes demi tetes HCl 0,2 M sambil diaduk perlahan hingga terbentuk gumpalan kasein atau koloid susu berubah dari putih keruh menjadi agak bening. Cek pH susu dengan kertas lakmus universal. Hentikan penambahan HCl jika pH kira-kira mencapai 4,5. 5. Dinginkan suspensi ini pada temperatur kamar dan biarkan selama 5 menit. 6. Lakukan dekantasi untuk memperoleh endapan kasein, atau penyaringan utuk memperoleh kembali endapan kasein yang terbuang selama dekantasi Perhatikan lipatan kertas saring yang digunakan dan cara melakukan penyaringan yang benar.



7. Tambahkan sedikit air pada endapan yang diperoleh, lakukan dekantasi kembali. 8. Resuspensi endapan dengan 30 mL etanol. 9. Lakukan penyaringan menggunakan corong kaca, cucilah endapan dengan 20 mL campuran etanol:heksana 1:1. cuci lagi endapan dengan 25 mL heksana. 10. Pindahkan endapan ke gelas arloji. 11. Keringkan, dan timbang tepung kasein kering yang diperoleh. 12. Amati juga warna kasein yang diperoleh. 3.5. Lembar Data Pengamatan Pelajari video dalam link berikut: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s kemudian lengkapi tabel berikut:



Asal susu



Wujud susu Volume Sampel Susu pada pH isoelektrik kasein Hasil dekantasi Hasil resuspensi dengan etanol Hasil pencucian dengan etanol:heksana 1:1 Hasil pencucian dengan heksana Berat kertas saring + kasein (gr) Berat kertas saring (gr) Berat kasein (gr)



Hasil percobaan Susu sapi segar yang diambil langsung dari peternak sapi Pujon 21-02-2021 Jam 17.00 kemudian disimpan di cold room dengan suhu 5 oC. Cair 50 mL Filtrat: Residu: Filtrat: Residu: Filtrat: Residu: Filtrat: Residu:



1,65 g



3.6. Diskusi Diskusikan analisa prosedur tentang tujuan dan prinsip fisika/ kimiawi (disertai reaksi kimia) yang terjadi pada setiap perlakuan. Diskusikan analisa hasil tentang rendemen dan kemurnian kasein yang anda peroleh. Bandingkan dengan rendemen secara teoritik! Tentukan pula rendemen rata-rata dan nilai standar deviasi kasein yang diperoleh dari susu sapi segar (berdasarkan data kelas). Bandingkan sifat fisik kasein yang anda peroleh dengan sifat fisik kasein secara teoritis. Analisis hasil yang Anda peroleh



Tugas Pendahuluan 1. Jelaskan prinsip percobaan ini! 3. Apa fungsi bufer asetat pH 4,7 dan HCl 0,2 M yang digunakan pada percobaan ini? Daftar Pustaka ------------ 1995. Diktat Penuntun Praktikum Biokimia. Univeritas Brawijaya: Malang Holum, J. R. 1978. Organic and Biological Chemistry. John Wiley & Sons: New York.



FORMAT RESUME VIDEO



ISOLASI PROTEIN KASEIN DARI SUSU SEGAR SAPI KELOMPOK: …………… ANGGOTA: 1. …………… 2. …………… 3. …………… Link Video: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s A. Pertanyaan Berapa rendemen protein casein susu sapi segar yang diperoleh dari Peternak Sapi Pujon tanggal 21 Februari 2021 sesuai dengan prosedur yang ada di video? B. Alat dan Bahan ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… C. Tujuan Percobaan ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… D. Prosedur ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… E. Hasil Percobaan Tiga kali pengulangan isolasi menghasilkan massa casein yang sama ……….…………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… F. Analisis dan Kesimpulan ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… G. Penjelasan - Interpretasi ….…………………….…………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………



……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… …...



FORMAT RESUME VIDEO



ISOLASI PROTEIN KASEIN DARI SUSU SEGAR SAPI KELOMPOK: …………… ANGGOTA: 1. …………… 2. …………… 3. …………… Link Video: https://www.youtube.com/watch?v=qzfFajukhTU&t=50s A. Pendahuluan ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… B. Metode ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… C. Hasil Percobaan Tiga kali pengulangan isolasi menghasilkan massa casein yang sama ……….…………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………………………………………………



D. Pembahasan - Interpretasi ….…………………….…………………………………………………………… - Penjelalsan/justifikasi …………….…………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… …... E. Kesimpulan ……………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………………………… …...