Pembahasan Uji Hopkins [PDF]

Citation preview

Pembahasan Uji Hopkins-Cole



Uji kualitatif yang terakhir yaitu uji Hopkins-Cole. Uji Hopkins-Cole merupakan uji yang dilakukan untuk mengetahui adanya kandungan asam amino yang bergugus indol (triptofan) dalam suatu protein. Prinsip dasar dari uji Hopkins-Cole ialah reaksi kondensasi yang terjadi pada gugus indol dengan aldehid dengan bantuan larutan asam kuat. Pereaksi Hopkins-Cole mengandung asam glioksilat, oleh karna itu sampel yang akan memberikan hasil positif adalah sampel triptofan dan albumin (Winarno, 2004). Sampel yang dianalisis antara lain kasein, triptofan, gelatin, dan tirosin. Uji ini dilakukan dengan menambahkan pereaksi Hopkins-Cole sebanyak 2 mL pada tiap sampel yang telah disediakan sebanyak 2 mL. Pereaksi ini akan membentuk dengan triptofan yang terkandung dalam sampel dan membentuk kompleks. Perlakuan selanjutnya yaitu penambahan 2 mL asam sulfat (H2SO4). Asam sulfat merupakan salah satu asam kuat yang dalam uji ini berfungsi mempercepat pembentukan reaksi kondensasi triptofan tersebut. Hal tersebut dikarenakan ssam sulfat sebagai oksidator dan juga sebagai dehidrator bagi asam glikosilat dalam sampel. Senyawa kompleks yang dihasilkan dari reaksi kondensasi ialah larutan asam 2,3,4,5-tertrahidro-karbalion-4-karboksilat. Sifat fisik dari kompleks tersebut ialah larutan berwarna dengan cincin ungu yang umumnya timbul pada permukaan larutan dalam tabung reaksi. Persamaan reaksi kondensasi yang terjadi pada percobaan yaitu sebagai berikut.



Gambar 4. Reaksi kondensasi Hasil percobaan pada uji kandungan protein menggunakan uji Hopkins-Cole ini hanya menghasilkan uji positif terhadap kasein. Hasil tersebut dikarenakan kasein menunjukkan adanya cincin ungu pada hasil percobaan, sedangkan pada senyawa lain yaitu gelatin, triptofan, dan tirosin tidak menghasilkan cincin ungu.



Hasil ini menandakan bahwa pada kasein mengandung gugus indol (triptofan) yang



akan



menghasilkan



asam



2,3,4,5-tertrahidri-karbalion-4-karboksilat



membentuk cincin ungu sedangkan gelatin, triptofan, dan tirosin tidak memiliki gugus indol (triptofan) sehingga tidak terjadi reaksi kondensasi dan pembentukan kompleks warna ungu. Hasil tersebut tidak sesuai dengan literatur bahwa Triptofan yang seharusnya menjadi prekursor (harus sesuai dengan literatur). Hal tersebut dikarenakan senyawa ini hanya memiliki gugus indol, tidak memiliki asam-asam amino dasar lainnya. Hasil yang sesuai seharusnya ialah kasein dan triptofan menghasilkan cincin ungu pada permukaan larutan karna kedua larutan mengandung gugus indol (Winarno, 2004).