3-Uji Jarak Lebur Dan Cemaran Sejenis [PDF]

Citation preview

MAKALAH ANALISIS FARMASI UJI JARAK LEBUR DAN CEMARAN SEJENIS AMITRIPTILIN HIDROKLORIDA



KELOMPOK 3 Kelas Analisis Farmasi B



Agnes Aurora Paramitha



1606930092



Agustyan Fadillah



1606930110



Alvina Wijaya Puteri



1206224672



Khansa Nursatyani



1206220560



Wiranti Anggraini



1206219956



PROGRAM PROFESI APOTEKER FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS INDONESIA DEPOK 2016



KATA PENGANTAR



Puji syukur kami panjatkan ke hadirat Allah, Tuhan Yang Maha Kuasa karena atas kehendak-Nya, makalah ini dapat terselesaikan tepat pada waktunya. Penulisan makalah ini ditujukan untuk memenuhi tugas mata kuliah Analisis Farmasi. Selain itu, tujuan penulisan makalah ini adalah untuk meningkatkan wawasan mahasiswa terkait pemahaman mengenai uji jarak lebur dan cemaran sejenis. Penyelesaian penulisan makalah ini tidak terlepas dari bantuan yang diberikan kepada tim penyusun. Oleh karena itu, tim penyusun mengucapkan ucapan terima kasih kepada: 1. Allah, Tuhan Yang Maha Kuasa, atas karunia-Nya, 2. Bapak Dr. Hayun, M.Si, Apt selaku dosen pembimbing mata kuliah Analisis Farmasi, 3. Semua pihak yang terkait dalam pembuatan makalah ini yang tidak semuanya dapat disebutkan satu-persatu. Tim penyusun menyadari bahwa makalah ini masih banyak kekurangan. Oleh karena itu, tim penyusun sangat mengharapkan adanya kritik dan saran agar makalah ini menjadi lebih baik dan berguna di masa yang akan datang. Atas perhatiannya tim penyusun makalah ini mengucapkan terima kasih.



Depok, September 2016



Tim Penyusun



ii



DAFTAR ISI HALAMAN JUDUL………………………………………………………………….i KATA PENGANTAR ................................................................................................. ii DAFTAR ISI ............................................................................................................... iii DAFTAR GAMBAR ................................................................................................... v DAFTAR TABEL ....................................................................................................... v BAB 1 PENDAHULUAN ............................................................................................ 1 1.1 Latar Belakang .................................................................................................... 1 1.2 Tujuan Penulisan ................................................................................................. 2 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA ................................................................................... 3 2.1 Parameter Uji ...................................................................................................... 3 2.1.1 Jarak Lebur ................................................................................................... 3 2.3 Cemaran Senyawa Sejenis .................................................................................. 6 2.3.1 Pengertian Cemaran Senyawa Sejenis ......................................................... 6 2.2 Monografi Bahan Baku ....................................................................................... 7 2.2.1 Amitriptilin Hidroklorida ............................................................................. 7 2.2.2 Diazepam.................................................................................................... 10 2.2.3 Gemfibrosil ................................................................................................ 12 2.2.4 Ketoprofen.................................................................................................. 16 BAB 3 METODOLOGI .............................................................................................. 18 3.1 Jarak Lebur ........................................................................................................ 18 3.1.1 Cara Kerja .................................................................................................. 18 3.1.2 Metode Penentuan Jarak Lebur Lainnya .................................................... 19 3.2 Uji Cemaran Sejenis.......................................................................................... 21 3.3 Amitriptilin Hidroklorida .................................................................................. 21 3.3.1 Jarak Lebur ................................................................................................. 21 3.3.2 Cemaran Senyawa Sejenis ......................................................................... 23



iii



3.4 Diazepam (Farmakope Indonesia IV) ............................................................... 24 3.4.1 Penetapan Jarak Lebur ............................................................................... 24 3.4.2 Uji Senyawa Sejenis Diazepam ................................................................. 25 3.5 Gemfibrozil (Farmakope Indonesia IV) ............................................................ 26 3.5.1 Penetapan Jarak Lebur ............................................................................... 26 3.5.2 Uji Cemaran Sejenis................................................................................... 27 3.6 Ketoprofen ........................................................................................................ 29 3.6.1 Penetapan Jarak Lebur ............................................................................... 29 3.6.2 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Ketoprofen ................................................ 30 BAB 4 PEMBAHASAN ............................................................................................. 32 4.1 Jarak Lebur ........................................................................................................ 32 4.2 Pembahasan Hasil ............................................................................................. 35 4.2.1 Penentuan Jarak Lebur Amitriptilin Hidroklorida ..................................... 35 4.2.2 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Amitriptilin Hidroklorida ......................... 36 4.2.4 Penentuan Jarak Lebur Diazepam .............................................................. 37 4.2.4 Uji Senyawa Sejenis Diazepam ................................................................. 37 4.3.5 Penentuan Jarak Lebur Gemfibrosil ........................................................... 38 4.2.6 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Gemfibrosil ............................................... 39 4.2.7 Penentuan Jarak Lebur Ketoprofen ............................................................ 40 4.2.8 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Ketoprofen ................................................ 40 BAB 5 DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 42



iv



DAFTAR GAMBAR



Gambar 2. 1 Alat Pengukuran Jarak Lebur ...............................................................................5 Gambar 2. 2 Alat Penentuan Jarak Lebur ..................................................................................5 Gambar 2. 3 Hasil Pengamatan Penentuan Jarak Lebur ............................................................6 Gambar 2. 4 Struktur Kimia Amitriptilin Hidroklorida .............................................................7 Gambar 2. 5 Struktur Kimia Diazepam ...................................................................................10 Gambar 2. 6 Struktur Kimia Gemfibrozil ................................................................................12 Gambar 2. 7 Struktur Kimia Ketoprofen .................................................................................16 Gambar 4. 1 Pipa kapiler yg telah terisi dan Termometer .......................................................34 Gambar 4. 2 Memasukkan sampel dengan koin ......................................................................34 Gambar 4. 3 Perangkat Mel Temp ...........................................................................................35 Gambar 4. 4 Struktur Kimia Cemaran A sampai I dari Gemfibrozil .......................................40 Gambar 4. 5 Struktur Kimia Cemaran A sampai I dari Ketoprofen ........................................41



DAFTAR TABEL



Tabel 3. 1 Masing-masing cemaran dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari batas yang ditentukan .......................................................................................................23 Tabel 4. 1 Masing-masing cemaran dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari batas yang ditentukan .......................................................................................................36



v



BAB 1 PENDAHULUAN



1.1 Latar Belakang Pembuatan obat memerlukan bahan-bahan aktif dan non aktif yang berkualitas baik agar diperoleh obat yang bermutu, aman, dan berkhasiat. Bahan-bahan yang akan dibuat menjadi obat harus diperhatikan keasliannya, kemurniannya, dan kualitasnya sebelum diformulasi. Untuk memastikan ketiga hal tersebut, banyak uji yang dapat dilakukan seperti identifikasi zat, uji cemaran umum, rotasi optik, kemurnian kromatografi, titik/jarak lebur, uji cemaran senyawa sejenis, uji batas cemaran, penetapan pH, dan penetapan kadar. Apabila suatu zat berhasil memenuhi syarat ujinya, maka zat tersebut dapat dinyatakan asli, murni,dan berkualitas, serta layak digunakan dalam formulasi obat. Titik lebur suatu senyawa merupakan temperatur dimana zat padat berada dalam kesetimbangan dengan bentuk cairnya. Zat padat akan berubah menjadi bentuk cairnya ketika molekul dari zat padat tersebut mendapatkan energi yang cukup untuk memecah ikatan intermolekulernya. Suhu lebur suatu zat tergantung pada struktur molekulnya. Sementara itu, jarak lebur didefinisikan sebagai rentang temperatur atau suhu pada saat bentuk padat tersebut mulai melebur hingga keseluruhan sampel melebur semua. Uji jarak lebur yang tertera pada masing-masing monografi digunakan untuk identifikasi dan karakterisasi suatu senyawa. Apabila dua sampel memiliki suhu lebur yang berbeda, dapat dikatakan bahwa kedua molekul sampel tersebut berbeda baik secara struktur atau bentuk konfigurasinya. Kedua sampel tersebut dapat diperkirakan merupakan isomer struktur. Apabila suhu lebur antara dua sampel sama, struktur molekul kedua zat tersebut diperkirakan sama. Uji jarak lebur juga dapat digunakan untuk menguji kemurnian zat. Suatu zat dapat dikatakan murni bila memiliki titik lebur yang sama dengan standar zat tersebut atau jarak lebur yang sempit (1-2oC atau kurang). Sebaliknya apabila suatu zat



1



memiliki suhu lebur yang berbeda atau jarak lebur yang melebar terhadap standar, maka dapat dikatakan bahwa zat tersebut tidak murni. Pemahaman mengenai kemurnian berubah dari waktu ke waktu dan tidak dapat dipisahkan dari perkembangan dalam kimia analisis. Cemaran merupakan perubahan dari suatu senyawa yang dulunya murni namun kemudian ditemukan bahwa senyawa tersebut menghasilkan senyawa baru, baik yang telah dikenali maupun tidak Senyawa sejenis merupakan senyawa yang memiliki struktur kimia yanghampir sama dengan senyawa obat. Senyawa ini merupakan cemaran atau produk samping, baik yang diketahui senyawanya maupun tidak, yang dihasilkan selama proses sintesis atau selama poroses penyimpanan senyawa obat.



1.2 Tujuan Penulisan Tujuan penulisan makalah ini adalah sebagai berikut : 1. Untuk mengetahui tujuan dari penetapan jarak lebur dan cemaran sejenis terhadap analisis senyawa 2. Untuk mengetahui prosedur uji penetapan jarak lebur dan cemaran sejenis pada senyawa-senyawa yang dianalisis 3. Untuk mengetahui contoh-contoh zat yang memiliki persyaratan uji jarak lebur dan cemaran sejenis



2



BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA



2.1 Parameter Uji 2.1.1 Jarak Lebur Titik lebur suatu senyawa merupakan temperatur dimana zat padat berada dalam kesetimbangan dengan bentuk cairnya. Zat padat akan berubah menjadi bentuk cairnya ketika molekul dari zat padat tersebut mendapatkan energi yang cukup untuk memecah ikatan intermolekulernya. Suhu lebur suatu zat tergantung pada struktur molekulnya. Sementara itu, jarak lebur didefinisikan sebagai rentang temperatur atau suhu pada saat bentuk padat tersebut mulai melebur hingga keseluruhan sampel melebur semua. Dalam Farmakope, jarak lebur atau suhu lebur zat padat didefinisikan sebagai rentang suhu atau suhu pada saat zat padat menyatu dan melebur sempurna, kecuali didefinisikan lain. Alat yang digunakan untuk penetapan titik lebur harus diperiksa ketepatan dan kebenarannya secara berkala dengan satu atau lebih dari enam Baku Pembanding Suhu Lebur BPFI, lebih baik digunakan satu baku yang melebur paling dekat dengan suhu lebur senyawa yang ditetapkan seperti yang tertera pada Baku Pembanding. Manfaat penetapan titik lebur atau jarak lebur, yaitu : 1. Suhu lebur sebagai indikator kemurnian Suatu zat dapat dikatakan murni bila memiliki titik lebur yang sama dengan standar zat tersebut atau jarak lebur yang sempit (1-2oC atau kurang). Sebaliknya apabila suatu zat memiliki suhu lebur yang berbeda atau jarak lebur yang melebar terhadap standar, maka dapat dikatakan bahwa zat tersebut tidak murni. 2. Suhu lebur sebagai alat untuk identifikasi dan karakterisasi Untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi suatu senyawa, senyawa tersebut harus dalam bentuk zat aktif murni dan dibandingkan dengan standar yang memang telah terbukti kemurniannya. Apabila dua sampel memiliki



3



suhu lebur yang berbeda, dapat dikatakan bahwa kedua molekul sampel tersebut berbeda baik secara struktur atau bentuk konfigurasinya. Kedua sampel tersebut dapat diperkirakan merupakan isomer struktur. Apabila suhu lebur antara dua sampel sama, struktur molekul kedua zat tersebut diperkirakan sama. Contoh alat penetapan jarak lebur yang sesuai terdiri dari: 1. Wadah gelas untuk tangas cairan dilengkapi dengan pengaduk dan diisi cairan yang cocok. Sebagai cairan umumnya digunakan silicon cair. 2. Alat pengaduk yang sesuai 3. Termometer yang akurat 4. Kaca pembesar yang cocok. 5. Pipa kapiler berukuran panjang lebih kurang 10 cm dan diameter dalam 0,8 mm sampai 1,2 mm dengan ketebalan dinding 0,2 mm sampai 0,3 mm. 6. Sumber panas yang terkendali a. Panas didapat dari api bebas atau listrik. b. Cairan dalam tangas dipilih dengan melihat suhu yang dikehendaki, tetapi umumnya digunakan parafin cair dan silikon cair yang baik untuk rentang suhu yang lebih tinggi. c. Cairan dalam tangas mempunyai kedalaman yang cukup sehingga thermometer dapat tercelup dengan pencadang raksa tetap berada lebih kurang 2 cm diatas dasar tangas.



4



Gambar 2.1. Alat Pengukuran Jarak Lebur



Gambar 2.2. Alat Penentuan Jarak Lebur



5



Gambar 2.3. Hasil Pengamatan Penentuan Jarak Lebur



2.3 Cemaran Senyawa Sejenis 2.3.1 Pengertian Cemaran Senyawa Sejenis Pemahaman mengenai kemurnian berubah dari waktu ke waktu dan tidak dapat dipisahkan dari perkembangan dalam kimia analisis. Jika sebuah senyawa yang dulunya dikatakan murni namun kemudian ditemukan bahwa senyawa tersebut menghasilkan senyawa baru, baik yang telah dikenali maupun tidak, senyawa tersebut dapat didefinisi ulang sebagai cemaran. Senyawa sejenis merupakan senyawa yang memiliki struktur kimia yang hampir sama dengan senyawa obat. Senyawa ini merupakan cemaran atau produk samping, baik yang diketahui senyawanya maupun tidak, yang dihasilkan selama proses sintesis atau selama poroses penyimpanan senyawa obat. Penentuan uji cemaran senyawa sejenis merupakan pengujian yang mengacu pada uji umum untuk analisa pengotor berupa produk samping dari senyawa obat, baik yang telah dikenali maupun yang belum, yang dihasilkan selama proses sintesis atau penyimpanan. Baku pembanding cemaran perlu diadakan dalam pengujian cemaran sejenis yang senyawa cemarannya masih belum dikenali.



6



2.2 Monografi Bahan Baku 2.2.1 Amitriptilin Hidroklorida



Gambar 2.4. Struktur Kimia Amitriptilin Hidroklorida



Nama kimia



:10,11-Dihidro-N,N-dimetil-5H-dibenzosikloheptanapropilamina hidroklorida



Rumus molekul



: C20H23N.HCl



Berat molekul



: 313,86



Persyaratan kadar



: 98,0% - 102,0%



Pemerian



:Serbuk hablur atau hablur kecil, putih atau hampir putih; tidak berbau atau hampir tidak berbau



Kelarutan



:Mudah



larut



dalam



air,



dalam



etanol,



dalam



klororform dan dalam metanol, tidak larut dalam eter Baku pembanding



: Amitriptilin hidroklorida BPFI, lakukan pengeringan dengan tekanan tidak lebih 5 mmHg pada suhu 60



0



hingga bobot tetap sebelum digunakan. Simpan dalam wadah tertutup rapat. Identifikasi a.



Spektrum serapan inframerah zat yang telah dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P, menunjukkan maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama seperti pada Amitriptilin Hidroklorida BPFI.



b.



Waktu retensi relatif puncak utama kromatogram Larutan Uji sesuai dengan Larutan Baku seperti Penetapan Kadar.



7



c.



Menunjukkan reaksi Klorida cara A,B dan C seperti yang tertera pada Uji Identifikasi Umum.



Jarak lebur



: Antara 195oC dan 199oC



pH



: Antara 5 dan 6



Susut pengeringan



: Tidak lebih dari 0,5%; lakukan pengeringan dengan tekanan tidak lebih dari 5 mmHg pada suhu 600C hingga bobot tetap



Sisa pemijaran



: Tidak lebih dari 0,1%



Logam berat



: Tidak lebih dari 10 bpj (Metode III)



 Penetapan Kadar  Lakukan penetapan dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi  Asam fosfat encer Campuran asam fosfat P-air (1:10).  Dapar : Larutkan 1,42 g natrium fosfat dibasa P dalam 1000 ml air. Atur pH hingga 7,7 dengan penambahan Asam fosfat encer.  Fase gerak : Buat campuran metanol P-Dapar (7:3). Saring dan awaudarakan.  Larutan baku : Timbang saksama sejumlah Amitriptilin Hidroklorida BPFI, larutkan dalam Fase gerak hingga kadar lebih kurang 0,2 mg per ml.  Larutan uji persediaan : Timbang saksama sejumlah zat, larutkan dalam Fase gerak hingga kadar lebih kurang 1 mg per ml.  Larutan uji : Encerkan Larutan uji persediaan dalam Fase gerak (1:5).  Larutan A persediaan : Timbang saksama sejumlah Senyawa Sejenis A Amitriptilin BPFI, larutkan dengan metanol P hingga kadar lebih kurang 1 mg per ml.  Larutan B persediaan : Timbang saksama masing-masing sejumlah Amitriptilin Hidroklorida BPFI, Senyawa Sejenis B Amitriptilin BPFI, Siklobenzaprin Hidroklorida BPFI, dan Nortriptilin Hidroklorida BPFI dan larutkan dalam Fase gerak hingga kadar berturut-turut lebih kurang 0,4 mg per ml; dan 0,6 mg per ml.



8



 Larutan kesesuaian sistem : Encerkan sejumlah volume Larutan A persediaan dan Larutan B persediaan dengan Fase gerak hingga kadar amitriptilin hidroklorida, senyawa sejenis A amitriptilin, senyawa sejenis B amitriptilin, siklobenzaprin hidroklorida dan nortriptilin hidroklorida berturut-turut lebih kurang 1μg per ml; 0,5 μg per ml; dan 1,5 μg per ml.  Sistem kromatografi : KCKT dilengkapi dengan detektor 215 nm dan kolom 4,6 mm x 25 cm berisi bahan pengisi L7 dengan ukuran partikel 5 μm. Laju alir ± 1,5 ml/menit. Suhu kolom pertahankan pada 45o. Lakukan kromatografi terhadap Larutan kesesuaian sistem, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti yang tertera pada Prosedur: waktu retensi relatif senyawa sejenis tertera pada Tabel dalam Senyawa sejenis; resolusi, R, antara puncak senyawa sejenis B amitriptilin dengan puncak nortriptilin tidak kurang dari 1,5. Lakukan kromatografi terhadap Larutan baku, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera pada Prosedur: simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 2,0%.  Prosedur : Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 20 μl) Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, lakukan kromatografi selama 40 menit, rekam kromatogram dan ukur respons puncak utama. Hitung persentase amitriptilin hidroklorida, C20H23N.HCl, dalam zat dengan rumus: 100



 CS adalah kadar Amitriptilin Hidroklorida BPFI dalam mg per ml Larutan baku; CU adalah kadar amitriptilin hidroklorida dalam mg per ml Larutan uji; rU dan rS berturut-turut adalah respons puncak Larutan uji dan Larutan baku.



9



2.2.2 Diazepam



Gambar 2.5. Struktur Kimia Diazepam Nama kimia



: 7-Kloro-1,3-dihidro-1-metil-5-fenil-2H-1 4-benzodiazepin-2-on



Rumus molekul



: C16H13CIN20



Persyaratan kadar



: Diazepam mengandung tidak kurang dari 98,5 % dan tidak lebih dari 101,0% C16H13CIN20 dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan



Pemerian



: Serbuk hablur, hampir putih sampai kuning; praktis tidak berbau



Kelarutan



: Praktis tidak larut dalam air; mudah larut dalam kloroform; larut dalam etanol



Identifikasi a. Spektrum serapan infra merah zat yang telah dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P, menunjukkan maksimum hanya pada panjang gelombang yang sama seperti pada diazepam BPFI b. Larutan 5 mg zat per ml aseton P menunjukkan reaksi seperti yang tertera pada Identifikasi secara Kromatografi lapis tipis , dalam bejana kromatografi yang tidak dijenuhkan dengan fase gerak etil asetat P-n-heptana P(1:1) Jarak lebur



: metode 1 antara 131 dan 135



10



Susut pengeringan



: Tidak lebih dari 0,5 %; lakukan pengeringan dalam hampa udara diatas fosfor pentoksida P pada suhu 60 selama 4 jam



Sisa pemijaran



: tidak lebih dari 0,1%



Logam berat



: metode III tidak lebih dari 20 bpj



Senyawa sejenis  Larutan uji : Timbang seksama 1,0 gr, masukkan kedalam labu tentukur 10 ml, larutkan dan encerkan dengan aseton P sampai tanda  Larutan baku (1) : Larutan 2- metil-amino-5-klorobenzofenon BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000)  Larutan baku (2) : Larutan 3-Amino-6-kloro-1-metil-4-fenilkarbostiril BPFI BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000)  Larutan baku (3) : Larutan 7-Kloro-1,3-dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazpin2-on BPFI dalam aseton P (3 dalam 10.000)  Prosedur : Lakukan seperti yang tertera pada kromatografi . Totolkan secara terpisah masing-masing 10 l larutan uji, larutan baku 1,2,3 pada jarak yang sama, 2,5 cm dari tepi bawah lempeng kromatografi campuran silika gel P 20 cm x 20 cm setebal 0,25 mm. Masukkan lempeng kedalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak etil setat P dan n-heptana P (1:1) hingga merambat 15 cm diatas garis penotolan. Angkat lempeng, biarkan fase gerak menguap, amati bercak dibawah sinar uv 254 nm dan semprot dengan larutan campuran segar (1:1) larutan besi (III) klorida P (1 dalam 10) dan kalium heksasianoferat (III) P (1 dalam 20). Tidak ada satupun bercak selian bercak utama yang lebih besar ukuran atau intensitasnya dibandingkan dengan bercak utama.  Larutan baku : Harga Rf semua bercak larutan uji sesuai dengan larutan baku yang menunjukkan tidak lebih dari 0,01 % -metilamino-5-klorobenzofenon, tidak lebih dari 0,1 % 3-amino-6-kloro-1-metil-4-fenilkarbostiril dan tidak lebih dari 0,3 % 7-kloro-1,3-dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazepin-2-on



11



 Penetapan kadar : Timbang saksama 800 mg larutkan dalam 75 ml anhidrida asetat P dalam labu erlenmeyer 250 ml. Titrasi dengan assm perklorat 0,1 N LV secara potensiometri, dengan menggunakan elektroda kaca dan elektroda kalomel yang berisi litium klorida P jenuh dalam asam asetat glasial P seperti yang tertera pada titrimetri. Lakukan penetapan blanko  Wadah dan penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat, tidak tembus cahaya



2.2.3 Gemfibrosil



Gambar 2.6. Struktur Kimia Gemfibrosil



Nama kimia



: Asam 2,2-Dimetil-5-(2,5-xililoksi)valerat



Rumus molekul



: C15H22O3



Berat molekul



: 250,33



Persyaratan kadar



: 98,0% - 102,%



Baku pembanding



: Gemfibrosil BPFI; lakukan pengeringan di atas silika gel P selama 4 jam sebelum digunakan. Simpan dalam wadah tertutup rapat. Senyawa Sejenis A Gemfibrosil BPFI,



[2,2-dimetil-5-



[2,5-dimetil-4-(propen-1-



il)fenoksi] asam valerat] (C18H26O3 BM 290,40); tidak boleh dikeringkan. Simpan dalam wadah tertutup rapat, pada suhu ruang.



12



Pemerian



: Hablur padat serupa lilin; putih.



Kelarutan



: Larut dalam etanol, metanol dan kloroform; praktis tidak larut dalam air.



Identifikasi



: Spektrum serapan inframerah zat yang didispersikan dalam kalium bromida P menunjukkan maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama seperti pada Gemfibrosil BPFI.



Jarak lebur



: Antara 58º dan 61º.



Air



: Metode I Tidak lebih dari 0,25%.



Logam berat



:Tidak lebih dari 20 bpj (Metode III)



Senyawa sejenis



: Senyawa sejenis A gemfibrosil tidak lebih dari 0,1%; cemaran tidak spesifik tidak lebih dari 0,1% dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari 0,5%. Lakukan penetapan dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi seperti tertera pada Kromatografi.



Metode  Fase gerak : Tambahkan 10 ml asam asetat glasial P ke dalam labu tentukur 1000-ml yang berisi 750 ml metanol P, encerkan dengan air sampai tanda dan saring.  Larutan kesesuaian sistem : Timbang saksama sejumlah Gemfibrosil BPFI, Senyawa Sejenis A Gemfibrosil BPFI dan 2,5-dimetilfenol, larutkan dan encerkan dengan Fase gerak hingga kadar berturut-turut lebih kurang 0,2; 0,05 dan 0,05 mg per ml.  Larutan baku : Timbang saksama masing-masing 10 mg Gemfibrosil BPFI dan Senyawa Sejenis A Gemfibrosil BPFI. Masukkan ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dan encerkan dengan metanol P sampai tanda. Pipet 5 ml masing-masing larutan ini ke dalam labu tentukur 50-ml dan encerkan dengan Fase gerak sampai tanda.



13



 Larutan uji : Timbang saksama lebih kurang 100 mg zat, masukkan ke dalam labu tentukur 10-ml, larutkan dan encerkan dengan Fase gerak sampai tanda. Prosedur Sistem kromatografi  Lakukan seperti tertera pada Kromatografi. Kromatograf cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor 276 nm dan kolom 4,0 mm x 25 cm berisi bahan pengisi L1. Laju alir lebih kurang 1 ml per menit. Lakukan kromatografi terhadap Larutan kesesuaian sistem, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera pada Prosedur  Waktu retensi relatif untuk 2,5 dimetilfenol; gemfibrosil dan senyawa sejenis A gemfibrosil berturut-turut adalah lebih kurang 0,35; 1,0 dan 2,1; simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 3,0%.  Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 100 μl) Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram untuk paling sedikit tiga kali waktu retensi gemfibrosil dan ukur respons puncak.  Hitung persentase senyawa sejenis A gemfibrosil dalam zat yang digunakan dengan rumus:



 C adalah kadar Senyawa sejenis A Gemfibrosil BPFI dalam mg per ml Larutan baku;  W adalah bobot zat dalam mg dari Larutan uji; ri dan  rS berturut-turut adalah respons puncak senyawa sejenis A gemfibrozil Larutan uji dan Larutan baku. Hitung persentase cemaran lain dalam zat yang digunakan dengan rumus:



14



 CS adalah kadar Gemfibrosil BPFI dalam mg per ml Larutan baku;  W adalah bobot zat dalam mg, dari Larutan uji;  ri adalah respons puncak masing-masing cemaran dari Larutan uji;  rS adalah respons puncak gemfibrosil dari Larutan baku. 



Penetapan kadar : Lakukan dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi seperti tertera pada Kromatografi.



Metode: 



Fase gerak: Tambahkan 10 ml asam asetat glasial P pada 800 ml metanol P dalam labu tentukur 1000-ml, encerkan dengan air sampai tanda, campur, saring melalui penyaring membran.







Larutan baku: Timbang saksama sejumlah Gemfibrosil BPFI, larutkan dalam metanol P hingga kadar lebih kurang 1 mg per ml. Pipet 5 ml larutan tersebut ke dalam labu tentukur 25-ml, encerkan dengan Fase gerak sampai tanda.







Larutan uji: Timbang saksama lebih kurang 100 mg zat, masukkan ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dan encerkan dengan metanol P sampai tanda. Pipet 5 ml larutan tersebut ke dalam labu tentukur 25-ml, encerkan dengan Fase gerak sampai tanda.







Larutan kesesuaian sistem : Buat larutan lebih kurang 0,2 mg Gemfibrosil BPFI dan 0,05 mg 2,5-xilenol per ml dalam Fase gerak.



Prosedur  Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada Kromatografi . Kromatograf cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor 276 nm dan kolom 3,9 mm x 30 cm berisi bahan pengisi L1. Laju alir lebih kurang 0,8 ml per menit.



15



 Lakukan kromatografi terhadap Larutan baku, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera pada  Simpangan baku relative pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 2,0%. Lakukan kromatografi terhadap lebih kurang 10 μl Larutan kesesuaian sistem: resolusi, R, antara gemfibrosil dan 2,5-xilenol tidak kurang dari 8,0.  Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 10 μl) Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur respons puncak utama.  Hitung jumlah dalam mg gemfibrosil, C15H22O3, dengan rumus:



 C adalah kadar Gemfibrosil BPFI dalam μg per ml Larutan baku;  rU dan rS berturut-turut adalah respons puncak Larutan uji dan Larutan baku. 



Wadah dan penyimpanan : Dalam wadah tertutup rapat.



2.2.4 Ketoprofen (Farmakope Indonesia Edisi V)



Gambar 2.7 Struktur kimia Ketoprofen



Nama kimia



:Asam 2-(3-benzoifenil)propionat



Rumus molekul



: C16H14O3



Berat molekul



: 254,3 16



Pemerian



: Serbuk hablur; putih atau hampir putih; tidak atau hampir tidak berbau



Kelarutan



: Mudah larut dalam etanol, kloroform dan eter; praktis tidak larut dalam air



Identifikasi



:



a. Spektrum serapan inframerah zat yang didispersikan dalam kalium bromida P, menunjukkan maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama seperti Ketoprofen BPFI. b. Serapan larutan zat (1 dalam 100.000) dalam metanol P-air (3:1) menunjukkan maksimum hanya pada panjang gelombang 258 nm. Berbeda tidak lebih dari 3%, dihitung terhadap zat yang sudah dikeringkan Jarak lebur



: Antara 92,0°C - 97,0°C.



Susut pengeringan



: Tidak lebih dari 0,5%; lakukan pengeringan pada tekanan tidak lebih dari 5,2 mm Hg, pada suhu 60 hingga bobot tetap, menggunakan 1 g zat.



Sisa pemijaran



: Tidak lebih dari 0,2%



Rotasi jenis



: Antara +1 dan -1, lakukan penetapan menggunakan 10 mg zat per ml dalam etanol dehidrat P.



Logam berat



: Tidak lebih dari 20 bpj.



Senyawa sejenis



: Lakukan penetapan dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi, masing-masing cemaran tidak lebih dari 0,2% dan total cemaran tidak lebih dari 1,0%.



Penetapan kadar



: Menggunakan Kromatografi cair kinerja tinggi. Ketoprofen mengandung tidak kurang dari 98,5% dan tidak lebih dari 101,0% C16H14O3, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan.



17



BAB 3 METODOLOGI



3.1 Jarak Lebur Berdasarkan Farmakope Indonesia V, jika tidak disebutkan lain maka metode yang digunakan adalah metode III.



3.1.1 Alat dan Bahan a. Alat:  Wadah gelas untuk tangas cairan transparan.  Alat pengaduk.  Termometer.  Sumber panas.  Pipa kapiler berukuran panjang ± 10 cm dan diameter dalam 0,8 – 1,2  mm dengan ketebalan dinding 0,2 – 0,3 mm. b. Bahan :  Bahan uji  Parafin cair/silikon cair



3.1.2 Cara Kerja 1. Gerus senyawa uji menjadi serbuk sangat halus. Keringkan di atas bahan pengering selama tidak kurang dari 16 jam. 2. Isi pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup dengan serbuk kering secukupnya hingga membentuk kolom di dasar tabung dengan tinggi 2,5 mm hingga 3,5 mm setelah diisi semampat mungkin. 3. Panaskan tangas hingga suhu lebih kurang 10o C dibawah suhu lebur yang diperkirakan, naikkan suhu dengan kecepatan 1o±0,5o per menit. 4. Masukkan kapiler, lanjutkan pemanasan hingga melebur sempurna.



18



5. Catat jarak lebur. Suhu pada saat kolom zat uji yang diamati terlepas sempurna dari dinding kapiler didefinisikan sebagai permulaan melebur, dan suhu pada saat zat uji mencair seluruhnya didefinisikan sebagai akhir peleburan.



3.1.3 Metode Penentuan Jarak Lebur Lainnya a. Metode I Gerus senyawa yang diuji menjadi serbuk yang sangat halus dan kecuali dinyatakan lain. Jika mengandung air hidrat, keringkan pada suhu yang tertera dimonografi, jika tidak mengandung air hidrat keringkan diatas bahan pengering yang sesuai. Caranya : isi pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup, dengan serbuk kering hingga 2,5 mm – 3,5 mm setelah diisi kemudian mengetukan pada permukaan padat. Panaskan tangas hingga suhu ≥ 30ᵒ dibawah suhu lebur yang diperkirakan. Angkat termometer dan secepatnya tempelkan tabung kapiler pada thermometer dengan membasahi keduanya dengan tetesan cair dari tangas atau sebaliknya. Tempatkan termometer dan lanjutkan pemanasan dengan pengadukan tetap hingga suhu naik ≥ 3ᵒ/ menit jika suhu ≥ 3ᵒ dibawah dari batas bawah jarak lebur yang diperkirakan, kurangi pemanasan hingga naik ≥ 1ᵒ - 2ᵒ/ menit. Suhu pada saat kolom uji yang diamati terlepas sempurna dari dinding kapiler didefinisikan sebagai permukaan melebur, dan suhu pada saat zat uji mencair seluruhnya didefinisikan suhu lebur. Kedua suhu tersebut berada dalam batas jarak lebur. b. Metode II Letakan zat uji pada wadah tertutup, dinginkan hingga 10ᵒ atau lebih rendah selama tidak kurang dari 2 jam. Tanpa diserbuk sebelumnya, sisihkan bahan yang sudah dingin kedalam pipa kapiler seperti metode I. Kemudian segera letakaan kapiler yang telah diisi kedalam desikator hampa, keringkan pada tekanan tidak lebih dari 20 mmHg selama 3 jam. Segera keluarkan dari desikator, lebur tutup ujung terbuka kapiler, dan sesegera mungkin lanjutkan penetapan jarak sebagai berikut : panaskan tangas hingga suhu 10ᵒ ± 1ᵒ dibawah rentang lebur yang diperkirakan. Kemudian masukkan kapiler yang



19



berisi zat uji dan panaskan dengan kenaikan suhu 3ᵒ ± 0,5ᵒ/ menit hingga melebur sempurna. Catat jarak lebur seperti yang tertera pada metode I. Jika ukuran partikel terlalu besar untuk kapiler dinginkan lebih dulu zat uji seprti diatas, gerus partikel dengan hati-hati denga tekanan rendah hingga sesuai dengan kapiler dan segera isikan kedalam kapiler. c. Metode IV Lebur hati-hati senyawa yang akan ditetapkan pada suhu serendah mungkin, masukkan kedalam pipa kapiler yang kedua ujungnya terbuka, hingga ke dalam 10 mm. Dinginkan kapiler yang telah terisi zat uji pada suhu 10ᵒ/ lebih rendah selama 24 jam, atau tempelkan pada es selama tidak kurang dari 2 jam. Kemudian tempelkan tabung pada thermometer dengan cara yang sesuai, atur dalam panas air sehingga ujung atas dari zat uji 10 mm dibawah permukan air dan panaskan seperti metode I, kecuali sampai 5 dari suhu lebur yang diperkirakan, atur suhu 0,5ᵒ - 1,0ᵒ/ menit. Suhu pada saat senyawa diamati dalam pipa kapiler menaik dalam suhu lebur. d. Metode V Lebur perlahan zat uji, sambil diaduk sehingga suhu 90ᵒ - 92ᵒ. Pindahkan sumber panas dan biarkan leburan senyawa mendingin sehingga 8ᵒ- 10 diatas suhu lebur yang diperkirakan. Dinginkan pencadang raksa hingga suhu 5ᵒ, bersihkan hingga kering, dan suatu masih dingin celupkan leburan senyawa hingga lebih kurang separuh bagian bawah pencadang terendam. Ambil secepatnya, dan tahan secara vertikal dari panas hingga permukaan menjadi buram, kemudian celupkan selama 5 menit kedalam tangas air pada suhu tidak lebih 16ᵒ. Letakkan erat termometer dalam tabung reakasi sehingga ujung terendam 15 mm diatas dasar tabung reaksi. Celupkan tabung reaksi dalam tangas air yang telah diatur pada suhu ± 16ᵒ dan naikan suhu tangas 2ᵒ/ menit hingga suhu 30ᵒ, kemudia turunkan suhu 1ᵒ/ menit dan catat suhu pada saat tetesan senyawa pertama meleleh lepas dari senyawa yang dilelehkan. Jika variasi 3 kali penetapan kurang dari 1ᵒ gunakkan hasil rata-rata ketiga penetapan tersebut sebagai suhu lebur. Jika variasi 3 kali



20



penetapan lebih besar 1ᵒ, lakukan 2 penetapan tambahan dan gunakan hasil ratarata dari 5 penetapan sebagai suhu lebur. e. Metode VI Siapkan alat dan bahan dan masukkan zat uji ke dalam pipa kapiler seperti pada metode I. Operasikan alat sesuai petunjuk pabrik. Panaskanpotongan logam sampai suhu dibawah 30o dari yang diperkirakan. Masukkan pipa kapiler dan lanjutkan pemanasan dengan kenaikan suhu1o – 2o per menit hingga melebur sempurna.



3.2 Uji Cemaran Sejenis Beberapa pengujian cemaran senyawa sejenis dapat dilakukan dengan menggunakan metode: 1. Kromatografi Gas, merupakan pemisahan atau deteksi senyawa yang mudah menguap dalam suatu campuran. Pemisahan dapat dilakukan secara isothermal (suhu tetap) dan dengan suhu yang terprogram (gradient suhu). 2. Kromatografi Lapis Tipis, merupakan pemisahan berdasarkan daya elusi fase gerak terhadap sampel. 3. Kromatografi Cair Kinerja Tinggi, merupakan pemisahan berdasarkan perbedaan distribusi komponen at terhadap fase gerak dan fase diam. Pengujian uji cemaran sejenis ini dimaksudkan untuk menghindari adanya senyawa-senyawa cemaran yang berpotensi toksik yang berbahaya jika dikonsumsi dan untuk mengetahui ada tidaknya pengaruh senyawa-senyawa cemaran tersebut terhadap aktivitas senyawa obat.



3.3 Amitriptilin Hidroklorida 3.3.1 Jarak Lebur a. Alat Alat pada penetapan jarak lebur yang sesuai terdiri dari wadah gelas untuk tangas cairan transparan, alat pengaduk yang sesuai, termometer yang akurat dan sumber panas yang terkendali. Cairan dalam tangas dipilih dengan melihat suhu yang dikehendaki, tetapi umumnya digunakan paraffin cair dan silikon cair yang baik untuk rentang suhu yang lebih tinggi. Cairan dalam tangas mempunyai



21



kedalaman yang cukup sehingga termometer dapat tercelup dengan pencadang raksa tetap berada lebih kurang 2 cm di atas dasar tangas. Panas di dapat dari api bebas atau listrik. Pipa kapiler berukuran panjang lebih kurang 10 cm dan diameter dalam 0,8 mm sampai 1,2 mm dengan ketebalan dinding 0,2 mm sampai 0,3 mm. b. Bahan Amitriptilin Hidroklorida, Amitriptilin Hidroklorida BPFI. c. Metode Jika tidak dinyatakan lain di dalam monografi maka jarak lebur Amitriptilin Hidroklorida menggunakan Metode III. Metode III : 1. Gerus Amitriptilin Hidroklorida menjadi serbuk sangat halus 2. Masukkan serbuk Amitriptilin Hidroklorida yang telah halus ke dalam pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup hingga membentuk kolom didasar tabung dengan tinggi 2,5 mm hingga 3,5 mm setelah diisi semampat mungkin dengan cara mengetukkan secukupnya pada permukaan padat. 3. Panaskan tangas hingga suhu ± 10 oC dibawah suhu lebur yang diperkirakan (1950C). Naikkan suhu dengan kecepatan 1o ± 0,5o per menit. 4. Masukkan kapiler, angkat termometer dan secepatnya tempelkan tabung kapiler pada termometer hingga tinggi bahan dalam kapiler setinggi pencadang raksa. Tempatkan kembali termometer dan lanjutkan pemanasan dengan pengadukan tetap secukupnya. 5. Bila suhu mencapai 5oC dibawah suhu terendah yang diperkirakan, lanjutkan pemanasan hingga melebur sempurna. 6. Catat jarak lebur.



22



3.3.2 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Tabel 3.1 Masing – masing cemaran dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari batas yang ditentukan Cemaran Senyawa sejenis A Amitriptilin Senyawa Sejenis B Amitriptilin Nortriptilin Hidroklorida Siklobenzaprin Hidroklorida Amitriptilin Hidroklorida Cemaran lain Jumlah semua cemaran 



Waktu Retensi Relatif 0,35



Batas (%) 0,05



0,52



0,15



0,60



0,15



0,76



0,15



1,0



-



-



Masing-masing 0,1 1,0



Lakukan penetapan dengan cara KCKT. Asam fosfat encer, Dapar, Fase gerak, Larutan kesesuaian sistem, Larutan baku dan Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada Penetapan Kadar.







Larutan uji : Gunakan Larutan uji persediaan seperti tertera pada Penetapan kadar.







Prosedur : Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama lebih kurang 20 µl Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogramdan ukur respons puncak utama. Hitung persentase masingmasing senyawa sejenis amitriptilin dalam zat yang digunakan dengan rumus:



100 



ri adalah respons puncak masing-masing senyawa sejenis amitriptilin dari Larutan uji; rS adalah respons puncak senyawa sejenis amitriptilin dari Larutan baku; CS adalah kadar masing-masing senyawa sejenis amitriptilin dalam mg per ml Larutan baku; CU adalah kadar amitriptilin hidroklorida dalam mg per ml Larutan uji.



23



3.4 Diazepam (Farmakope Indonesia IV) 3.4.1 Penentuan Jarak Lebur a. Alat Alat pada penetapan jarak lebur yang sesuai terdiri dari wadah gelas untuk tangas cairan transparan, alat pengaduk yang sesuai, termometer yang akurat dan sumber panas yang terkendali. Cairan dalam tangas dipilih dengan melihat suhu yang dikehendaki, tetapi umumnya digunakan paraffin cair dan silikon cair yang baik untuk rentang suhu yang lebih tinggi. Cairan dalam tangas mempunyai kedalaman yang cukup sehingga termometer dapat tercelup dengan pencadang raksa tetap berada lebih kurang 2 cm di atas dasar tangas. Panas di dapat dari api bebas atau listrik. Pipa kapiler berukuran panjang lebih kurang 10 cm dan diameter dalam 0,8 mm sampai 1,2 mm dengan ketebalan dinding 0,2 mm sampai 0,3 mm. b. Bahan Diazepam, Diazepam BPFI. c. Metode Jarak Lebur diazepam berada diantara 131 dan 135 dengan menggunakan Metode I. Metode I : 1. Gerus diazepam menjadi serbuk sangat halus 2. Masukkan serbuk diazepam yang telah halus ke dalam pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup hingga membentuk kolom didasar tabung dengan tinggi 2,5 mm hingga 3,5 mm setelah diisi semampat mungkin dengan cara mengetukkan secukupnya pada permukaan padat. 3. Panaskan tangas hingga suhu ± 30 oC dibawah suhu lebur yang diperkirakan (1480C). 4. Masukkan kapiler, angkat termometer



dan secepatnya tempelkan tabung



kapiler pada termometer dengan membasahi keduanya dengan tetesan cairan dari tangas atau sebaliknya dan atur hingga tinggi bahan dalam kapiler setinggi pencadang raksa. Tempatkan kembali termometer dan lanjutkan pemanasan dengan pengadukan tetap secukupnya hingga menyebabkan suhu 24



naik ± 3 o permenit. Pada saat suhu ± 3 o dibawah dari batas bawah jarak lebur yang diperkirakan, kurangi pemanasan sehingga suhu naik ± 1



o



hingga 2



o



per menit 5. Lanjutkan pemanasan hingga melebur sempurna 6. Suhu pada saat kolom zat uji yang diamati terlepas sempurna dari dinding kapiler didefinisikan sebagai permulaan melebur dan suhu pada saat zat uji mencair seluruhnya didefinisikan sebagai akhir pelebutan ataua suhu lebur. Kedua suhu tersebut berada dalam batas jarak lebur.



3.4.2 Uji Senyawa Sejenis Diazepam Metode : Kromatografi Lapis Tipis Persyaratan



: Harga Rf semua bercak larutan uji sesuai dengan larutan baku yang menunjukkan tidak lebih dari 0,01 % 2-metilamino-5klorobenzofenon, tidak lebih dari 0,1 % 3-amino-6-kloro-1metil-4-fenilkarbostiril dan tidak lebih dari 0,3 % 7-kloro-1,3dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazepin-2-on



Bahan



: diazepam, larutan baku 1,2,3



Larutan uji



:Timbang seksama 1,0 gr, masukkan kedalam labu tentukur 10 ml, larutkan dan encerkan dengan aseton P sampai tanda.



Larutan baku (1)



:Larutan 2- metil-amino-5-klorobenzofenon BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000).



Larutan baku (2)



:Larutan 3-Amino-6-kloro-1-metil-4-fenilkarbostiril BPFI BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000).



Larutan baku (3)



:Larutan 7-Kloro-1,3-dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazpin-2-on BPFI dalam aseton P (3 dalam 10.000).



Prosedur



:



1. Lakukan seperti yang tertera pada kromatografi . 2. Totolkan secara terpisah masing-masing 10 l larutan uji, larutan baku 1,2,3 pada jarak yang sama, 2,5 cm dari tepi bawah lempeng kromatografi campuran silika gel P 20 cm x 20 cm setebal 0,25 mm.



25



3. Masukkan lempeng kedalam bejana kromatografi yang berisi fase gerak etil setat P dan n-heptana P (1:1) hingga merambat 15 cm diatas garis penotolan. 4. Angkat lempeng, biarkan fase gerak menguap, amati bercak dibawah sinar uv 254 nm dan semprot dengan larutan campuran segar (1:1) larutan besi (III) klorida P (1 dalam 10) dan kalium heksasianoferat (III) P (1 dalam 20). Tidak ada satupun bercak selain bercak utama yang lebih besar ukuran atau intensitasnya dibandingkan dengan bercak utama. Harga Rf semua bercak larutan uji sesuai dengan larutan baku yang menunjukkan tidak lebih dari 0,01 % 2-metilamino-5-klorobenzofenon, tidak lebih dari 0,1 % 3-amino-6-kloro1-metil-4-fenilkarbostiril dan tidak lebih dari 0,3 % 7-kloro-1,3-dihidro-5fenil-2H-1,4-benzodiazepin-2-on 3.5 Gemfibrozil (Farmakope Indonesia IV) 3.5.1 Penentuan Jarak Lebur a. Alat Alat pada penetapan jarak lebur yang sesuai terdiri dari wadah gelas untuk tangas cairan transparan, alat pengaduk yang sesuai, termometer yang akurat dan sumber panas yang terkendali. Cairan dalam tangas dipilih dengan melihat suhu yang dikehendaki, tetapi umumnya digunakan paraffin cair dan silikon cair yang baik untuk rentang suhu yang lebih tinggi. Cairan dalam tangas mempunyai kedalaman yang cukup sehingga termometer dapat tercelup dengan pencadang raksa tetap berada lebih kurang 2 cm di atas dasar tangas. Panas di dapat dari api bebas atau listrik. Pipa kapiler berukuran panjang lebih kurang 10 cm dan diameter dalam 0,8 mm sampai 1,2 mm dengan ketebalan dinding 0,2 mm sampai 0,3 mm. b. Bahan Gemfibrosil BPFI; lakukan pengeringan di atas silika gel P selama 4 jam sebelum digunakan. c. Metode Jarak lebur Gemfibrozil antara 580 dan 610 . Jika tidak dinyatakan lain di dalam monografi sehingga jarak lebur Gemfibrozil menggunakan Metode III.



26



Metode III : 1. Gerus Gemfibrozil menjadi serbuk sangat halus 2. Masukkan serbuk Gemfibrozil yang telah halus ke dalam pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup hingga membentuk kolom didasar tabung dengan tinggi 2,5 mm hingga 3,5 mm setelah diisi semampat mungkin dengan cara mengetukkan secukupnya pada permukaan padat. 3. Panaskan tangas hingga suhu ± 10 oC dibawah suhu lebur yang diperkirakan (580C). Naikkan suhu dengan kecepatan 1o ± 0,5o per menit. 4. Masukkan kapiler, angkat termometer



dan secepatnya tempelkan tabung



kapiler pada termometer dan atur hingga tinggi bahan dalam kapiler setinggi pencadang raksa. Tempatkan kembali termometer dan lanjutkan pemanasan dengan pengadukan tetap secukupnya. 5. Bila suhu mencapai 5oC dibawah suhu terendah yang diperkirakan, lanjutkan pemanasan hingga melebur sempurna. 6. Catat jarak lebur



3.5.2 Uji Cemaran Sejenis Alat : Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Bahan



: Gemfibrosil BPFI, asam asetat glasial P, methanol P, 2,5 dimetilfenol



Metode



:



 Fase gerak : Tambahkan 10 ml asam asetat glasial P ke dalam labu tentukur 1000-ml yang berisi 750 ml metanol P, encerkan dengan air sampai tanda dan saring.  Larutan kesesuaian system : Timbang saksama sejumlah Gemfibrosil BPFI, Senyawa Sejenis A Gemfibrosil BPFI dan 2,5-dimetilfenol, larutkan dan encerkan dengan Fase gerak hingga kadar berturut-turut lebih kurang 0,2; 0,05 dan 0,05 mg per ml.  Larutan baku : Timbang saksama masing-masing 10 mg Gemfibrosil BPFI dan Senyawa Sejenis A Gemfibrosil BPFI. Masukkan ke dalam labu tentukur



27



100-ml, larutkan dan encerkan dengan metanol P sampai tanda. Pipet 5 ml masing-masing larutan ini ke dalam labu tentukur 50-ml dan encerkan dengan Fase gerak sampai tanda.  Larutan uji



: Timbang saksama lebih kurang 100 mg zat, masukkan ke



dalam labu tentukur 10-ml, larutkan dan encerkan dengan Fase gerak sampai tanda. Prosedur Sistem kromatografi  Lakukan seperti tertera pada Kromatografi. Kromatograf cair kinerja tinggi dilengkapi dengan detektor 276 nm dan kolom 4,0 mm x 25 cm berisi bahan pengisi L1. Laju alir lebih kurang 1 ml per menit. Lakukan kromatografi terhadap Larutan kesesuaian sistem, rekam kromatogram dan ukur respons puncak seperti tertera pada Prosedur  Waktu retensi relatif untuk 2,5 dimetilfenol; gemfibrosil dan senyawa sejenis A gemfibrosil berturut-turut adalah lebih kurang 0,35; 1,0 dan 2,1; simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang tidak lebih dari 3,0%.  Suntikkan secara terpisah sejumlah volume sama (lebih kurang 100 μl) Larutan baku dan Larutan uji ke dalam kromatograf, rekam kromatogram untuk paling sedikit tiga kali waktu retensi gemfibrosil dan ukur respons puncak.  Hitung persentase senyawa sejenis A gemfibrosil dalam zat yang digunakan dengan rumus:



 C adalah kadar Senyawa sejenis A Gemfibrosil BPFI dalam mg per ml Larutan baku;  W adalah bobot zat dalam mg dari Larutan uji; ri dan



28



 rS berturut-turut adalah respons puncak senyawa sejenis A gemfibrozil Larutan uji dan Larutan baku.  -Hitung persentase cemaran lain dalam zat yang digunakan dengan rumus:



 CS adalah kadar Gemfibrosil BPFI dalam mg per ml Larutan baku;  W adalah bobot zat dalam mg, dari Larutan uji;  ri adalah respons puncak masing-masing cemaran dari Larutan uji;  rS adalah respons puncak gemfibrosil dari Larutan baku



3.6 Ketoprofen 3.6.1 Penentuan Jarak Lebur Berdasarkan Farmakope Indonesia Edisi V, penentuan jarak lebur untuk Ketoprofen menggunakan Metode I. a. Alat



:







Wadah gelas untuk tangas cairan transparan







Alat pengaduk







Termometer







Sumber panas







Pipa kapiler berukuran panjang 10 cm dan diameter dalam 0,8 – 1,2 mm dengan ketebalan dinding 0,2 – 0,3 mm.



b. Bahan 



:



Bahan uji



c. Prosedur kerja 1. Gerus senyawa yang diuji menjadi serbuk yang sangat halus, dan kecuali dinyatakan lain, jika mengandung air hidrat ubah menjadi anhidrat dengan



29



pengeringan pada suhu yang tertera pada monografi, atau, jika senyawa tidak mengandung air hidrat, keringkan diatas bahan pengering yang sesuai selama tidak kurang dari 16 jam. 2. Isi pipa kapiler kaca yang salah satu ujungnya tertutup, dengan serbuk kering secukupnya hingga membentuk kolom di dasar tabung dengan tinggi 2,5 – 3,5 mm setelah diisi semampat mungkin dengan cara mengetukkan secukupnya pada permukaan padat. 3. Panaskan tangas hingga suhu ≥30°C dibawah suhu lebur yang diperkirakan 4. Angkat termometer dan secepatnya tempelkan tabung kapiler pada termometer dengan membasahi keduanya dengan tetesan cair dari tangas atau sebaliknya 5. Tempatkan termometer dan lanjutkan pemanasan dengan pengadukan tetap hingga suhu naik ≥3°C/menit jika suhu ≥3°C dibawah dari batas bawah jarak lebur yang diperkirakan, kurangi pemanasan hingga naik 1°C-2°C/menit. 6. Suhu pada saat kolom uji yang diamati terlepas sempurna dari dinding kapiler didefinisikan sebagai permukaan melebur, dan suhu pada saat zat uji mencair seluruhnya didefinisikan sebagai suhu lebur. Kedua suhu tersebut berada dalam batas jarak lebur.



3.6.2 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Ketoprofen Metode : Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) Persyaratan



: Masing-masing cemaran tidak lebih dari 0,2% dan total cemaran tidak lebih dari 1,0%.



Bahan 



: Fase gerak Buat campuran larutan amonium asetat P 1%-metanol P-aetonitril P (55:30:15), atur pH hingga 6,5 dengan penambahan asam asetat glasial P, awaudarakan. (Buat semua larutan segar)







Larutan baku



30



Timbang saksama sejumlah 3-Asetil-benzofenon BPFI, larutkan dalam Fase grak hingga diperoleh kadar 0,0025%. 



Larutan uji Timbang saksama sejumlah zat, larutkan dalam Fase gerak hingga diperoleh kadar 0,50%.







Enceran larutan uji Encerkan sejumlah volume Larutan uji dengan Fase gerak hingga diperoleh kadar 0,0010%



Sistem kromatografi :  Detektor



: 233 nm



 Kolom



: 4,6 mm x 20 cm berisi bahan pengisi L1







: 1,0 ml/menit



Laju alir



Prosedur



:



1. Suntikkan secara terpisah sejumlah Larutan baku, Larutan uji dan Enceran larutan uji ke dalam kromatografi, rekam kromatogram dan ukur luas puncak. 2. Lanjutkan kromatografi selama lima kali waktu retensi ketoprofen. 3. Puncak Larutan uji sesuai dengan puncak Larutan baku luasnya tidak lebih besar dari luas puncak Enceran larutan uji, luas dari puncak sekunder lain tidak lebih besar dari dua setengah kali luas puncak Enceran larutan uji dan tidak lebih dari tiga puncak semacam ini mempunyai luas lebih besar dari luas puncak Enceran larutan uji. Lanjutkan kromatografi selama lima kali waktu retensi ketoprofen.



31



BAB 4 PEMBAHASAN



4.1 Penentuan Jarak Lebur Jarak lebur atau suhu didefinisikan sebagai rentang suhu atau suhu pada saat zat padat menyatu atau melebur sempurna. Panas yang diabsorbsi ketika satu gram padatan melebur dikenal sebagai panas peleburan. Panas tambahan selama proses peleburan tidak memberikan perubahan temperatur, sampai seluruh padatan hilang, karena panas ini dirubah menjadi energi molekuler yang potensial untuk mengubah seluruh padatan menjadi cairan. Suhu lebur juga didefinisikan sebagai suhu dimana cairan murni dan padatan berada dalam kesetimbangan. Dengan kata lain, suhu kesetimbangan pada tekanan luar 1 atm disebut sebagai titik beku atau titik lebur normal. Perubahan titik lebur terhadap tekanan dapat diperoleh dengan menggunakan persamaan Clapeyron, yaitu :



T Vt  Vs T P Hf Dimana Vt dan Vs adalah volume molar cairan dan padatan, ∆Hf adalah panas peleburan molar, ∆T adalah perubahan suhu lebur yang terjadi karena perubahan tekanan ∆P. titik lebur sebenarnya tidak mengalami perubahan yang signifikan dengan adanya perubahan tekanan. Contohnya pada air, kenaikan tekanan 1 atm menurunkan titik beku air sekitar 0,0075oK, atau kenaikan atm sebesar 133 atm akan menurunkan titik beku 1o. Hal-hal yang mempengaruhi jarak lebur suatu senyawa adalah berat molekul dan struktur simetris molekul, serta kuatnya ikatan antar unsur dalam senyawa tersebut. Semakin kuat ikatan tersebut, semakin besar energi yang dibutuhkan untuk memutuskan ikatan, sehingga semakin tinggi pula titik lebur senyawa tersebut. Titik lebur hidrokarbon jenuh akan naik dengan naiknya berat molekul, karena gaya Van Der Waals diantara molekul-molekul kristal menjadi lebih besar dengan



32



bertambahnya jumlah atom karbon. Titik lebur alkana dengan jumlah atom karbon genap lebih tinggi daripada hidrokarbon dengan jumlah atom karbon yang ganjil. Panas peleburan dapat dianggap sebagai panas yang dibutuhkan untuk menaikkan jarak antar atom sehingga memungkinkan terjadinya peleburan. Dengan mengetahui titik lebur atau suhu lebur suatu senyawa, maka dapat diketahui kemurnian senyawa tersebut. Senyawa kristal organik nonionik yang murni akan memiliki jarak lebur yang lebih tajam atau sempit (biasanya 0,5o-1o). Adanya sejumlah kecil cemaran akan menurunkan titik lebur dan perluasan jarak lebur, misalnya 146o-149o. Melalui jarak lebur, identifikasi dan karakteristik suatu senyawa juga dapat diketahui. Apabila dua sampel memiliki jarak lebur yang berbeda maka kedua molekul tersebut berbeda baik secara struktur atau bentuk konfigurasinya. Kedua senyawa tersebut dapat diperkirakan adalah isomer struktur. Apabila kedua sampel memiliki jarak lebur yang sama, maka dapat diperkirakan kedua sampel tersebut memiliki struktur yang sama. Menurut Farmakope Indonesia, penetapan jarak lebur suatu senyawa, jika tidak dinyatakan dalam monografi, metode yang digunakan adalah Metode III. Pada pelaksanaannya, persiapan sampel yang tidak sempurna adalah penyebab utama hasil yang tidak akurat. Persyaratan utama agar mendapatkan hasil yang baik yaitu sampel harus berupa serbuk yang sangat halus. Hal tersebut akan menyebabkan transfer panas ke sampel menjadi lebih efisien. Sampel yang memiliki bentuk kristal harus digerus menggunakan mortir hingga menjadi serbuk yang sangat halus dan homogen. Apabila sampel dalam ukuran besar diuji jarak leburnya, maka transfer panas ke sampel menjadi tidak merata sehingga hasil yang didapatkan menjadi tidak akurat. Jumlah sampel yang digunakan pada pengujian jarak lebur haruslah tepat. Jumlah sampel yang terlalu banyak akan menyebabkan jarak lebur menjadi lebuh besar karena dibutuhkan panas ekstra agar sampel tersebut mencair secara keseluruhan. Hal tersebut menyebabkan hasil yang didapat menjadi tidak akurat. Pembahasan Prosedur Pipa kapiler yang digunakan adalah pipa kapiler yang berdinding tipis (0,2 mm - 0,3 mm) dan salah satu ujungnya harus ditutup agar dapat diisi. Untuk dapat 33



menutup salah satu ujungnya dapat dilakukan dengan membakar salah satu ujungnya pada pembakar bunsen sambil memutar-mutar pipa kapiler hingga ujungnya tertutup sempurna. Kemudian, untuk memasukkan serbuk sampel ke dalam pipa kapiler dilakukan dengan menekan perlahan ujung pipa yang terbuka ke sampel dari arah atas lalu dipadatkan dengan cara mengetukkan pipa perlahan ke permukaan padat. jika sampel belum memenuhi pipa kapiler hingga 2,5 - 3mm, sisa sampel dimasukkan dengan menggunakan koin dengan tepi bergerigi atau cara lain yang lebih efektif.



Gambar 4.1 Pipa kapiler yg telah terisi dan termometer



Gambar 4.2 Memasukkan sampel dengan koin



Farmakope Indonesia mencantumkan alat yang digunakan untuk penetapan jarak lebur terdiri dari wadah gelas untuk tangas cairan transparan, alat pengaduk



34



yang sesuai, termometer yang akurat dan sumber panas yang terkendali. Seperangkat alat tersebut lebih dikenal dengan istilah Mel-Temp. Mel-Temp dilengkapi dengan lensa untuk melihat sampel yang berada pada pipa kapiler agar dapat memastikan sampel mulai melebur dan seluruh sampel melebur sempurna. Jarak dari mata ke lensa adalah 15 cm.



Gambar 4.3 Perangkat Mel-Temp



4.2 Pembahasan Hasil 4.2.1 Penentuan Jarak Lebur Amitriptilin Hidroklorida Amitriptilin Hidroklorida, BM: 313,87 jarak lebur : 195o-199o. Jarak lebur zat adalah jarak antara suhu awal dan suhu akhir peleburan zat. Suhu awal dicatat pada saat zat mulai menciut atau membentuk tetesan pada dinding pipa kapiler, suhu akhir dicatat pada saat hilangnya fase padat sedangkan suhu lebur zat adalah suhu pada saat zat tepat melebur seluruhnya yang ditunjukkan pada saat fase padat tepat hilang. Titik



35



beku merupakan salah satu karakteristik yang dimiliki suatu senyawa dan didefinisikan sebagai suhu dimana keadaan padat dan cair berada dalam kesetimbangan. Umumnya tinggi rendahnya suhu lebur pada suatu zat padat dipengaruhi oleh bentuk zat padat tersebut dan kekuatan/jenis ikatan yang ada pada padatan tersebut. Pada suatu padatan bentuk kristal dan ikatan kovalen maka akan memiliki suhu lebur yang lebih tinggi jika dibandingkan dengan padatan lain dengan ikatan van der waals. Faktor lainnya yang juga berpengaruh terhadap jarak lebur adalah bobot molekul. Semakin besar bobot molekul suatu senyawa maka semakin tinggi pula titik leburnya. Amitriptilin Hidroklorida memiliki bobot molekul paling besar dibanding senyawa lainnya sehingga amitriptilin memiliki titik lebur yang paling tinggi. Selanjutnya, untuk pemilihan metode penentuan jara lebur dipengaruhi oleh karakteristik senyawa. Untuk bahan baku yang bersifat higroskopis perlu dilakukan pengeringan terlebih dahulu. Jadi, metode penetapan kadarnya menggunakan metode 1, yang ada tahapan pengeringannya. 4.2.2 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Amitriptilin Hidroklorida Tabel 4.1 Masing – masing cemaran dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari batas yang ditentukan Cemaran Senyawa sejenis A Amitriptilin Senyawa Sejenis B Amitriptilin Nortriptilin Hidroklorida Siklobenzaprin Hidroklorida Amitriptilin Hidroklorida Cemaran lain Jumlah semua cemaran



Waktu Retensi Relatif 0,35



Batas (%) 0,05



0,52



0,15



0,60



0,15



0,76



0,15



1,0



-



-



Masing-masing 0,1 1,0



Cemaran sejenis merupakan cemaran senyawa organik yang keberadaannya perlu diuji untuk menjamin keamanan senyawa uji. Pada uji cemaran sejenis, 36



umumnya jenis cemaran telah diketahui, sehingga diperlukan baku senyawa cemaran. Jika cemaran senyawa sejenis ada lebih dari 1, pada umum nya hanya ditentukan 1 atau 2 senyawa sejenis yang diukur presentase cemarannya, dipilih berdasarkan senyawa yang paling berpengaruh terhadap bahan bakunya (seperti kadarnya yang besar dan toksisitasnya yang besar). Selanjutnya pemilihan metode penetapan cemaran senyawa sejenis dingaruhi oelh karakteristik cemaran. Untuk cemaran yang mudah menguap maka penetapannya dengan menggunakan kromatografi gas. 4.2.4 Penentuan Jarak Lebur Diazepam Jarak lebur merupakan salah satu parameter dalam uji kemurnian. Keberadaan kontaminan dalam jumlah yang sedikit dapat menghasilkan peningkatan jarak lebur dan menyebabkan terjadinya peleburan pada suhu yang lebih rendah dibandingkan titik lebur senyawa murni (Furniss, Hannaford, Smith, & Tatchell, 1989). Jarak lebur umumnya terpisah dalam rentang 1 sampai 2 derajat. Namun, beberapa senyawa dalam farmakope memiliki rentang lebih dari dua derajat, seperti diazepam yang memiliki rentang empat derajat, yakni dalam rentang 131o-135o. Semakin banyak ikatan yang dimiliki oleh suatu senyawa, maka jarak lebur yang dihasilkan lebih tinggi juga. Hal ini disebabkan oleh tingginya energi yang dibutuhkan oleh senyawa tersebut untuk memutuskan seluruh ikatan yang dimilikinya. Menurut Farmakope Indonesia IV, metode yang digunakan untuk menentukan jarak lebur diazepam adalah menggunakan metode I. Metode I digunakan untuk zat padat mengandung hidrat atau mudah menyerap air. Oleh karena itu, pada saat pengujian suhu penangas dinaikkan 
sampai suhu 30 oC karena kandungan uap air dalam serbuk akan mempengaruhi pengujian sehingga hidrat atau uap air harus dihilangkan dulu. Senyawa yang akan diuji dengan metode I wajib digerus dan dikeringkan dulu sebelum dimasukkan ke dalam pipa kapiler. 4.2.4 Uji Senyawa Sejenis Diazepam Uji cemaran sejenis diazepam menggunakan metode kromatografi lapis tipis. Kromatografi lapis tipis adalah teknik pemisahan dimana fase diam di lapisan tipis pada kaca, atau kertas. Larutan dari analit didepositkan di lempeng sebelum proses.



37



Pemisahan ini didasarkan pada adsorpsi, partisi, pertukaran ion atau kombinasi dari mekanisme ini dan dilaksanakan oleh migrasi (perpindahan) dari diazepam dalam fase gerak campuran etil setat P dan n-heptana P (1:1) melalui fase diam lempeng silika gel G. Pemilihan Silika gel G dikarenakan Silika gel G bersifat polar sehingga mampu menahan pergerakan diazepam. Di buat 3 larutan baku, yakni larutan baku 1 adalah Larutan 2- metil-amino-5-klorobenzofenon BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000), larutan baku 2 adalah larutan 3-Amino-6-kloro-1-metil-4-fenilkarbostiril BPFI dalam aseton P(1 dalam 100.000) dan larutan baku 3 adalah larutan 7-Kloro1,3-dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazpin-2-on BPFI dalam aseton P (3 dalam 10.000). Setelah larutan uji dan larutan baku ditotolkan sesuai prosedur, lempeng diangkat, diamati dibawah sinar uv 254 nm dan semprot dengan larutan campuran segar (1:1) larutan besi (III) klorida P (1 dalam 10) dan kalium heksasianoferat (III) P (1 dalam 20). Pereaksi semprot bertujuan untuk membuat bercak tampak sehingga dapat ditentukan letaknya dan dihitung Rf- nya. Tidak ada satupun bercak selain bercak utama yang lebih besar ukuran atau intensitasnya dibandingkan dengan bercak utama. Harga Rf semua bercak larutan uji sesuai dengan larutan baku yang menunjukkan tidak lebih dari 0,01 % 2-metilamino-5-klorobenzofenon, tidak lebih dari 0,1 % 3-amino-6-kloro-1-metil-4-fenilkarbostiril dan tidak lebih dari 0,3 % 7kloro-1,3-dihidro-5-fenil-2H-1,4-benzodiazepin-2-on 4.3.5 Penentuan Jarak Lebur Gemfibrosil Menurut Farmakope Indonesia, penetapan jarak lebur suatu senyawa, jika tidak dinyatakan dalam monografi, metode yang digunakan adalah Metode III. Pada pelaksanaannya, persiapan sampel yang tidak sempurna adalah penyebab utama hasil yang tidak akurat. Persyaratan utama agar mendapatkan hasil yang baik yaitu sampel harus berupa serbuk yang sangat halus. Hal tersebut akan menyebabkan transfer panas ke sampel menjadi lebih efisien. Sampel yang memiliki bentuk kristal harus digerus menggunakan mortir hingga menjadi serbuk yang sangat halus dan homogen. Apabila sampel dalam ukuran besar diuji jarak leburnya, maka transfer panas ke sampel menjadi tidak merata sehingga hasil yang didapatkan menjadi tidak akurat.



38



Jumlah sampel yang digunakan pada pengujian jarak lebur haruslah tepat. Jumlah sampel yang terlalu banyak akan menyebabkan jarak lebur menjadi lebuh besar karena dibutuhkan panas ekstra agar sampel tersebut mencair secara keseluruhan. Hal tersebut menyebabkan hasil yang didapat menjadi tidak akurat. 4.2.6 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Gemfibrosil Pengujian senyawa sejenis dilakukan untuk mengetahui senyawa lain yang memiliki kemiripan sifat serupa dan diduga terdapat dalam suatu zat yang dapat menyebabkan bias dalam perhitungan kadar. Pengujian senyawa sejenis juga berkaitan erat dengan khasiat serta keamanan dalam penggunaan obat. Persyaratan senyawa senyawa sejenis A gemfibrosil tidak lebih dari 0,1%; cemaran tidak spesifik tidak lebih dari 0,1% dan jumlah semua cemaran tidak lebih dari 0,5%.Pada British Pharmacopeia 2009, terdapat rumus molekul dari masing-masing cemaran A, B, C, D, E, F,G, H,I:



39



Gambar 4.4. Struktur Kimia Cemaran A sampai I dari Gemfibrosil



Penggunaan KCKT dalam uji cemaran senyawa sejenis merupakan metode yang selektif dibandingkan metode lainnya. Selain itu, metode ini juga cocok untuk zat yang tidak mudah menguap.



4.2.7 Penetuan Jarak Lebur Ketoprofen Pada senyawa ketoprofen, metode jarak lebur yang dilakukan adalah Metode I. Metode I digunakan untuk zat padat yang mengandung hidrat atau mudah menyerap air. Oleh karena itu, pada saat pengujian suhu penangas dinaikkan sampa suhu 30°C karena kandungan uap air dalam serbuk akan mempengaruhi pengujian sehingga hidrat atau uap air harus dihilangkan terlebih dahulu. Senyawa yang akan diuji dengan metode I wajib digerus dan dikeringkan sebelum dimasukkan ke dalam pipa kapiler. Selain itu penurunan titik lebur tidak hanya disebabkan oleh adanya zat pengotor namun juga dapat disebabkan oleh besar dan banyaknya kristal. Setelah digerus maka luas permukaan akan bertambah dan lebih mudah menyerap panas. Pada metode I, setelah melebur zat akan mengalami destruksi (menjadi hitam) dan tidak bisa digunakan kembali.



4.2.8 Uji Cemaran Senyawa Sejenis Ketoprofen Pengujian senyawa sejenis dilakukan untuk mengetahui senyawa lain yang memiliki kemiripan sifat serupa dan diduga terdapat dalam suatu zat yang dapat menyebabkan bias dalam perhitungan kadar. Pengujian senyawa sejenis juga



40



berkaitan erat dengan khasiat serta keamanan dalam penggunaan obat. Persyaratan senyawa sejenis Ketoprofen dengan kuantitas masing-masing cemaran tidak lebih dari 0,2% dan jumlah cemaran tidak lebih dari 1,0%. Pada British Pharmacopeia 2009, persyaratan untuk uji cemaran senyawa sejenis Ketoprofen untuk pengotor A, B, C, D, E, F tidak lebih dari 0,2%. Berikut terdapat rumus molekul dari masingmasing cemaran A, B, C, D, E, F:



Gambar 4.5. Struktur Kimia Cemaran A sampai F dari Ketoprofen



Penggunaan KCKT dalam uji cemaran senyawa sejenis merupakan metode yang selektif dibandingkan metode lainnya. Selain itu, metode ini juga cocok untuk zat yang tidak mudah menguap.



41



BAB 5 KESIMPULAN 5.1 Kesimpulan 1. Pengujian jarak lebur dan uji cemaran senyawa sejenis dapat digunakan untuk metode uji kemurnian suatu bahan baku farmasi. 2. Bahan baku Amitriptilin HCl memiliki jarak lebur 195°-199° dengan metode pengujian yang digunakan adalah metode III. 3. Bahan baku Amitriptilin HCl dapat diuji cemaran senyawa sejenis menggunakan kromatografi cair kinerja tinggi (KCKT) dengan menghitung presentase yang diperoleh agar tidak melewati batas yang ditetapkan dalam standar acuan. 4. Senyawa lain yang dapat dilakukan pengujian jarak lebur dan pengujian cemaran senyawa sejenis adalah Diazepam, Glibenklamida dan Ketoprofen.



Saran 



Metode pengujian jarak lebur dan cemaran senyawa sejenis dilakukan sesuai dengan standar acuan.







Metode pengujian harus dipelajari lebih lanjut terutama apabila digunakan pada sediaan yang memiliki kandungan beberapa senyawa.



42



DAFTAR PUSTAKA



British Pharmacopeia. (2009). British Pharmacopeia, Volume I & II. London: Medicines and Healthcare Products Regulatory Agency (MHRA) Kementrian Kesehatan Republik Indonnesia. (2014). Farmakope Indonesia Edisi Kelima. Jakarta: Direktorat Jenderal Bina Kefarmasian dan Alat Kesehatan.



43