Biopsi Aspirasi Jarum Halus [PDF]

Citation preview

30/03/2020



ASPIRASI JARUM HALUS



BIOPSI ASPIRASI JARUM HALUS / FINE NEEDLE ASPIRATION CYTOLOGY (FNAB) 30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



1



ASPIRASI JARUM HALUS



ALAT YANG DIPERLUKAN UNTUK FNAB Peralatan dasar yang diperlukan untuk melakukan FNAB sederhana terdiri dari :



1.



Cara mengambil sel jaringan tubuh yang dicurigai suatu neoplasma



2.



Cara mengambil dengan teknik aspirasi memakai spuit dan jarum injeksi biasa untuk lesi yang teraba



3.



Pada lesi yang tidak teraba, perlu panduan Usg ; ct-scan ; mri dan bila perlu memakai jarum dengan mandrine



Sebuah syringe holder atau syringpistol / Terumo syring :3cc, 5 cc, 10 cc Jarum / Needle disposible ukuran 21-25 G Kaca objek untuk pembuatan preparat apus dari aspirat jaringan dan telah diberi nomor/ kode sitologi Kapas alcohol



Pemeriksaan AJH dapat dilakukan di unit rawat jalan setiap rumah sakit maupun praktek. Walaupun akurasi hasil pemeriksaan AJH masih di bawah pemeriksaan histopatologi dari biopsi terbuka, tetapi dengan panduan data dari pemeriksaan klinis, radiologi dan laboratorium diharapkan hasil pemeriksaan yang cukup baik dengan biaya yang relatif lebih murah.



Botol / kotak kaca berisi alkohol 95 % ( untuk fiksasi ) Sarung tangan steril Botol penampung cairan aspirat Plester Ethyl chloride spray



30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



ALAT YANG DIGUNAKAN UNTUK - A J H



3



Tissue



30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



4



MACAM JARUM YANG DAPAT DIGUNAKAN UNTUK AJH



Jarum disposible ukuran 22-25 gauge Jarum disposible dengan mandrine



1



30/03/2020



CARA PELAKSANAAN AJH



ALAT BANTU YANG DIGUNAKAN SYRINGE HOLDERS



Franzen syringe holder



Cameco syringe pistol Dng Spuit disposible 10 cc



Simple syringe holder



PENYULIT TINDAKAN AJH



AJH DENGAN PANDUAN



ULTRASONOGRAFI



CARA MEBUAT SEDIAAN APUS DARI ASPIRAT AJH



CT-SCAN



2



30/03/2020



CARA MEMBUAT SEDIAAN APUS DARI ASPIRAT - AJH CARA MEMBUAT SEDIAAN DARI HASIL ASPIRAT PADAT



CARA MEMBUAT SEDIAAN DARI HASIL ASPIRAT CAIR



BIOPSI JARUM HALUS TANPA ASPIRASI



PEMBUATAN SEDIAAN APUS HASIL FNAB Untuk pembuatan preparat apus, digunakan kaca objek yang bersih yang sudah diberi label nomor/kode sitologi sesuai dengan nomor yang ada di formulir permintaan FNAB. Prosedur pembuatan apusan hasil aspirasi adalah sebagai berikut : ❑Setiap kaca objek yang sudah di beri nomor di tetesi dengan1-2 tetes aspirat ❑Aspirat diapuskan dengan merata pada kaca objek dengan menggunakan kaca objek yang lainnya. ❑Sediaan apus tersebut segera difiksasi dalam alkohol 95 % untuk pewarnaan Papanicolaou, sedangkan untuk pewarnaan Giemsa difiksasi dalam metanol setelahdikeringkan terlebih dahulu.



30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



16



GAMBARAN MIKROSKOPIK SEDIAAN HASIL AJH SKUAMUS CELL CARCINOMA



ADENOCARCINOMA



3



30/03/2020



AJH KELENJAR LIMFE REAKTIF LIMFADENOPATI



AJH



NHL LIMFOSITIK



NHL PLASMACITOID



NHL LARGE B CELL CENTROCYTIC CENTROBLASTIC



NHL T CELL



IMUNOBLASTIC



PAYUDARA LESI FIBROKISTIK



FIBROADENOMA



INFILTRATING DUCT CARCINOMA



MEDULARE ADENOCARCINOMA



CONVULATED T CELL



AJH TYROID



AJH LIVER



COLOID GOITER



CIRRHOSIS



CA HEPATIS HEPATOCELLULARE



ADENOCARCINOMA PAPILER



ADENOMA / ADENOCARCINOMA FOLIKULER



AJH PROSTAT



AJH PROSTAT



ALAT BANTU YANG DIGUNAKAN BPH



ADENOCARCINOMA



4



30/03/2020



AJH TUMOR JARINGAN LUNAK GIANT CELL TUMOR



OSTEOSARKOMA



Terimakasih ☺



30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



26



VARIASI PENGECATAN PAPANICULOU (RS SARDJITO/AMC)



LAMPIRAN



No



30/03/2020



FITRIA DINIAH J.S, S.SI., M.SC



Reagen Fiksasi dengan ALKOHOL 95 %



2



ALKOHOL 75 %



3 dip



3



15 menit



ALKOHOL 50 %



3 dip



4



AIR mengalir



2 – 5 menit



5



HEMATOXYLIN



5 – 7 menit



6



AIR mengalir



2 – 5 menit



7



ALKOHOL 75 %



3 dip



8



ALKOHOL 95 %



3 dip



9



Cat OG



10



ALKOHOL 95 %



3 dip



11



ALKOHOL 95 %



3 dip



12



Cat EA



13



ALKOHOL 95 %



3 dip



14



ALKOHOL 95 %



3 dip



15



ALKOHOL 95 %



3 dip



3 – 5 menit



3 – 5 menit



27



AMC PROTOKOL H.E. AUTOMATIC STAINING / RS SARDJITO No



Waktu



1



VARIASI PROTOKOL H.E. LAB. PA FK UGM



No Tabung



Reagen



Waktu



1



-



OVEN



5 menit



2



1



XYLENE



1 menit



3



2



XYLENE



2 menit



4



3



XYLENE



2 menit



5



4



ALKOHOL 100%



2 menit



6



5



ALKOHOL 96 %



2 menit



7



6



ALKOHOL 70 %



No Tabung



Reagen



Waktu



1



Hot Plate



5 menit (lalu diangin-anginkan)



2



XYLENE



4 menit



3



XYLENE



4 menit



4



XYLENE



4 menit



5



ALKOHOL 96 %



3 menit



6



ALKOHOL 96 %



3 menit



1 menit



7



ALKOHOL 96 %



3 menit



8



-



Water I



1 menit



8



ALKOHOL 70 %



3 menit



9



7



MAYER HEMATOXYLIN



7,5 menit



9



Water I



3 menit (mengalir)



10



-



Water II



7,5 menit



10



MAYER HEMATOXYLIN



11



8



EOSINE (Alkohol)



1 menit



11



Water II



7 menit (mengalir)



12



-



Water III



15 detik



12



EOSINE (Alkohol)



10 dip (kalo baru)-2 menit (kalo lama)



13



9



ALKOHOL 80 %



15 detik



13



Water III



beberapa dip



14



10



ALKOHOL 96 %



15 detik



14



ALKOHOL 96 %



5 dip



15



11



ALKOHOL 100%



30 detik



15



ALKOHOL 96 %



5 dip



16



12



XYLENE



1 menit



16



ALKOHOL 96 %



5 dip



17



13



XYLENE



1 menit



17



ALKOHOL 96 %



5 dip (lalu diangin2kan sampai kering)



18



XYLENE



1 menit, lalu mounting



7 menit



5



30/03/2020



VARIASI PAPANICOLOAU LAB. PA FK UGM



VARIASI GIEMSA LAB. PA FK UGM



Dari fiksasi kiriman / langsung dari pengambilan sampel 1.



Ethyl Alkohol 95 %



15 menit



2.



Tap Water



5 menit



3.



Mayer Haematoxylin



3 – 5 menit



4.



Tap Water



5.



Ethyl Alkohol 95 %



6.



Ethyl Alkohol 95 %



7.



EA



8.



Ethyl Alkohol 95 %



10 dip



9.



Ethyl Alkohol 95 %



10 dip



10.



Ethanol Absolute



5 dip



11.



Ethanol Absolute



5 dip



12.



Xylol



quick



13.



Xylol



quick



14.



Examine & Mount (EZ Mount)



1.



Jaringan blok parafin dipotong 3-4µ, letakkan di atas obyek glass (obyek glass sudah diolesi Poly L Lysin kemudian disimpan semalam di inkubator suhu 45°C), kemudian dibiarkan semalam di inkubator 45 °C Deparafinisasi (xylol 3 tempat, sama dg HE) Cuci di air mengalir sebentar (jgn kena air langsung), lalu cuci dengan aquades beberapa dip



1.



Fiksasi dengan Metanol



2.



Cuci dengan aquadest/biarkan kering tanpa dicuci



15 menit



3.



Giemsa



10 dip



4.



Cuci dengan aquadest kemudian keringkan di udara



4.



10 dip



5.



E Z Mount



5.



Ditetesi H2O2 3% (H2O2 biasanya 30% dpt encerkan dg metanol, 10cc H2O2 30% tambah 90cc metanol), diamkan 15-20 menit, cuci dengan air mengalir sebentar Cuci aquades beberapa dip, cuci dg PBS 3 kali @5menit, rendam dalam bufer citrat dalam microwave 600 °C selama 20 menit, lalu biarkan dingin 20-30 menit, lalu cuci PBS 3 kali @5 menit



6.



Bloking dengan Normal Serum 5 menit (KIT)



7. 8.



Bersihkan tepi-tepinya saja Inkubasi (dikotak yg bawahnya ada airnya suhu ±25 °C) dengan antibodi selama 1 jam (bisa semalam) Cuci/rendam dg PBS (pH 7,2-7,4) 3 kali @5 menit



9. 10. 11.



5 – 10 menit



5 menit



1 – 3 menit



PENGECATAN IMUNOHISTOKIMIA (LAB VISION ,LEBIH MURAH ) 2. 3.



Sediaan setelah benar-benar kering di udara



Catatan perbandingan pembuatan giemsa : Giemsa : Bufer phospat (atau aguades/air hujan, ph asam) = 1 : 4



12. Tetesi dg Streptavidin Peroksidase selama 5 menit (KIT) 13. Cuci dg PBS 3 kali @5menit 14. Tetesi Kromogen/DAB (jgn kena sinar/bungkus dg aluminium foil, saat netesi matikan lampu) selama 5-15 menit ( untuk pengecatan tertentu dg AEC) 15. Cuci dg air mengalir 10-15 menit 16. Counterstain dg Hematoxylin Mayer (bisa jg Harris utk DAB) 3-4 menit (AEC harus dg Mayer) 17. Cuci dg air mengalir 10-15 menit 18. Dehidrasi (alk 80%, 95%, absolut), lalu xylol 3 kali (sama HE) TETAPI kalau AEC tanpa xylol 19. Mounting (DAB dg EZ mount, AEC dg Gliserin) SEDIAAN SITOLOGI Letakkan sampel di obyek glass Poli L Lysin Biarkan kering di udara



Tetesi dg antibodi sekunder Biotynlated selama 5 menit (KIT) Tetesi dg PBS 3 kali @5menit (setiap direndam PBS, diletakkan & goyang/diputar diatas Speed Regulator dg kecepatan low)



Fixasi dg Acetone 10 menit di frezer Bersihkan tepi-tepinya, cuci dg PBS 2-3 kali @3-5 menit Teteskan H2O2 3% 20 menit, cuci air mengalir, cuci aquades, PBS/TBS 3 kali @5menit, selanjutnya sama prosedur diatas mulai nomer 6



PENGECATAN IMUNOHISTOKIMIA (KIT DAKO)



14. Cuci air mengalir sebentar tapi tidak kena air langsung



1.



Sampel blok parafin dipotong 3-4µ, dan ditempelkan pada obyek glass Poly L Lysin (Poly L Lysin yg digunakan utk mengoles obyek glass, PLL diencerkan dg NaCl 9:1, 900µ PLL:100µ NaCl utk semua IHC)



15. Teteskan / masukkan ke HE Mayer atau Harris selama 2 menit



2.



Biarkan semalam di incubator suhu 45 °C



17. Dehidrasi lalu pakai Xylol (kalau DAB)



3.



Deparafinisasi



18. Mounting EZ mount atau Gliserin, tutup obyek glass



4.



Rendam dalam buffer citrate (campuran 2,1 gr citrat acid + 1 lt aquades) pH 6 (kalau asam naikkan dg 5-10 cc NaOH, campurkan pelan2, kalau menurunkan pH dg HCl) dan taruh dalam microwave 600 °C selama 5 menit dan lanjutkan dengan suhu 450 °C selama 5 menit



5.



Biarkan dingin ±30 menit



6.



Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit



7.



Teteskan bloking peroxidase selama 5 menit (KIT)



8.



Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit



9.



Inkubasi dg antibodi primer ±30 menit



10.



Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit



11.



Teteskan polymer dan inkubasi selama 30 menit (KIT)



12.



Cuci dg TBS/PBS 2 kali @3-5 menit



13.



Teteskan counterstain DAB / AEC dan biarkan selama 20 menit



16. Cuci air mengalir selama 5-7 menit



SEDIAAN SITOLOGI 1.



Letakkan sampel di obyek glass Poly L Lysin



2.



Biarkan kering di udara



3.



Fixasi dg Acetone selama 10 menit di frezer pendingin, kalau untuk kultur pakai Methanol (karena tempatnya dr plastik) di frezer pendingin juga



4.



Bersihkan tepi-tepinya, cuci PBS / TBS 2-3 kali @3-5 menit



5.



Selanjutnya mulai prosedur no. 7



*Untuk semua: sebelum obyek glass diolesi Poly L Lysin, diolesi/direndam HCl 1% min ½ jam lalu cuci dg air lalu di tetesi/direndam alkohol bertingkat, lalu dikeringkan, baru diolesi PLL



6



30/03/2020



HAEMATOXILLIN ACCORDING MAYER



REAGENT



Water (heat to 80 °C and add: .....)



4000mL



Alumunium-kalium sulfate dodecahydrate



200 gr



Haematoxillin (Merck 1.15937)



4 gr



Sodium iodate



ACID ALKOHOL



0,8 gr



Chlorate hydrate



100 gr



Citric acid



2 gr



: 99 cc alcohol 70 % + 1 cc HCl PA



HNO3 15 %



: 230 cc HNO3 65 % + 770 mL aquadest



Buffer formalin



: Na H2PO4 H2O



Eosine Solution (0,5 %)



4 gr



Na2 HPO4



6,5 gr 900 mL



Eosine gelb (Merck 1.15935)



10 gr



Aquadest



Aquadest



2000mL



Formaldehid solution 35 % 100 mL



For use: this 0,5 % eosine solution is diluted with alcohol 96 % (1:1) and a minimal amount of acetic acid is added 1 part eosine 0,5 %



EDTA



→ untuk decalcifikasi dan IHC → 0,37 gr EDTA + 1 L aquadest, pH 8



1 part alcohol 96 % per 100 mL 1 drops acetic acid glacial



REAGENT IHC Buffer citrat



: 2,1 gr citrat acid + 1 L aquadest tambahkan 13 mL NaOH2 M, ukur pH 6,0



Buffer phosphat: K H2PO4



6,63 gr Na2 HPO4 . 2H2O



3,2 gr



dilarutkan dlm 1 L aquadest



PBS 10x 0,5 liter : NaCl (Merck)



43,75 gr



Na2 HPO4 . 2H2O



7,11 gr



K H2PO4 aquadest



1,05 gr 500 mL



7