![Laporan Praktikum Mikrobiologi Acara 1 - Michael Marune Putra Sianturi [PDF]](https://pdfs.asia/img/200x200/laporan-praktikum-mikrobiologi-acara-1-michael-marune-putra-sianturi.jpg)
9 0 727 KB
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
1
LAPORAN PRAKTIKUM ACARA I
TEKNIK DASAR MIKROBIOLOGI
Nama
: Michael Marune Putra Sianturi
NIM
: 19/441301/BI/10293
Golongan(Kel)
: Jumat (2)
Asisten
: Bernadetta Rosari P.R.
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI FAKULTAS BIOLOGI UNIVERSITAS GADJAH MADA YOGYAKARTA 2021
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
2
ACARA I
TEKNIK DASAR MIKROBIOLOGI I.
Latar Belakang Saat bekerja di laboratorium, berbagai teknologi akan digunakan sesuai dengan kebutuhan penelitian. Khusus di bidang mikrobiologi, penelitian laboratorium membutuhkan mikroorganisme hidup, sehingga perlu dilakukan sterilisasi pada daerah penelitian, alat dan peralatan yang digunakan. Dengan begitu, kemurnian budaya yang dipelajari dapat dipertahankan dan pencemaran dapat dicegah (Istini, 2020). Kemudian dibuat teknik aseptik yang merupakan rangkaian metode yang digunakan untuk menjaga sterilitas media dan tes (Bykowski et al., 2019). Menurut metode sterilisasi, teknologinya dibagi menjadi tiga kategori: mekanik, kimia dan radiasi (Cappuccino & Welsh, 2019).
Gambar 1. Beberapa macam kategori teknik aseptis (Cappuccino & Welsh, 2019) Saat melakukan kegiatan di laboratorium, penting untuk mendisinfeksi peralatan yang digunakan terlebih dahulu, karena desinfeksi adalah kunci keberhasilan penelitian. Pembakar bunsen digunakan dalam teknik aseptik untuk sterilisasi dengan memanaskan alat yang digunakan di Bunsen. Kaldu hara(Nutrient broth) merupakan media yang biasa digunakan untuk pertumbuhan mikroorganisme. Mediumnya bisa digunakan untuk benih cair atau padat. Nutrisi kaldu sendiri terdiri dari 5 gram protein ept sebagai sumber nitrogen dan 3 gram ekstrak daging sapi sebagai sumber karbon, vitamin dan garam organik (Cappuccino & Welsh, 2019). Kedua zat ini dilarutkan dalam 1000 ml akuades untuk membuat media kultur. Dalam bentuk padatnya terdapat tiga jenis media yaitu agar slant, deep tube agar dan flat agar.
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
3
Gambar 2. Berbagai macam bentuk padat nutrient broth (Cappuccino & Welsh, 2019) Saat mengumpulkan sampel mikroorganisme di alam, mustahil untuk menemukan satu koloni yang hanya terdiri dari satu jenis mikroorganisme. Oleh karena itu, perlu dilakukan pemisahan mikroorganisme agar jenis biakan yang dibudidayakan dapat diamati guna memenuhi kebutuhan penelitian. Untuk mengurangi jumlah sampel dalam koloni, pengenceran serial atau pengenceran bertahap biasanya dilakukan (Pambudi et al., 2017). Hal ini memungkinkan bakteri diisolasi dan diperbanyak sebagai kultur murni. Dalam memisahkan bakteri terdapat tiga teknik yaitu plat difusi, plat coretan dan plat miring (Cappuccino & Welsh, 2019). Pelat difusi(Spread-plate) adalah teknik pemisahan mikroba yang relatif mudah di mana spatel Drygalski digunakan untuk menyebarkan sampel yang diencerkan ke media agar-agar. Kemudian setelah inokulasi, tutup cawan petri dan inkubasi. Setelah inkubasi, amati pertumbuhan koloni di atas piring (Cappuccino & Welsh, 2019).
Gambar 3. Proses penyebaran sampel pada metode spread-plate (Cappuccino & Welsh, 2019) Streak plate juga diklasifikasikan sebagai teknik pemisahan mikroba yang relatif cepat di mana jarum loop digunakan untuk mengikis sampel yang diencerkan pada permukaan media kultur. Kemudian setelah inokulasi, tutup cawan petri dan inkubasi. Setelah masa inkubasi, akan diamati pertumbuhan koloni yang kepadatannya sesuai dengan urutan dan pola garis. Dari goresan pertama
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
4
hingga goresan terakhir, koloni secara bertahap akan terlihat terpisah dan terisolasi (Cappuccino & Welsh, 2019).
Gambar 4. Hasil inkubasi dari metode streak-plate (Cappuccino & Welsh, 2019) Saat Anda ingin menginokulasi mikroorganisme anaerobik, pelat pembuangan biasanya digunakan. Caranya dengan menuangkan media kultur cair bersama sampel mikroba ke dalam cawan petri, kemudian dihomogenisasi dan diinkubasi hingga menggumpal. Setelah masa inkubasi, tampak koloni mikroba tersebar di permukaan dan media agar-agar.
Gambar 5. Proses penuangan media agar pada metode pour-plate (Cappuccino & Welsh, 2019)
II. Tujuan Tujuan dari praktikum ini adalah: a. Mengenal teknis aseptis serta fungsi alat-alat laboratorium mikrobiologi b. Mengenal macam-macam media kultur serta cara pembuatannya c. Mengenal teknik-teknik serta manfaat dari isolasi mikrobia
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
5
III. Metode 1. Alat Dalam praktikum ini digunakan alat-alat seperti jarum inokulasi sebagai alat inokulasi mikroba pada media agar tegak, jarum ose sebagai alat inokulasi bakteri dan khamir yang bersifat aerobik, jarum enten sebagai alat inokulasi miselium kapang, mikropipet beserta pipet tip sebagai alat pengambilan suspensi yang memiliki satuan volume mikroliter, corong sebagai alat bantu pemindah larutan, propipet beserta pipet ukur sebagai alat pengambil larutan yang memiliki takaran volume tertentu, microtube sebagai wadah tampung larutan yang memiliki satuan volume mikroliter, flakon sebagai wadah spesimen, tabung reaksi bermerk Pyrex sebagai media agar, pinset sebagai alat bantu pengambilan bahan, gelas beker bermerk Pyrex sebagai wadah larutan, gelas ukur bermerk Pyrex•Herma sebagai alat takar larutan, lampu spiritus sebagai media sterilisasi alat lain, tabung Smith (corong fermentasi) sebagai wadah untuk reaksi fermentasi, labu ukur sebagai tempat pengenceran larutan, spatel Drigalski sebagai alat penyebar suspensi mikroba pada penggunaan teknik spread-plate, spatula sebagai alat pengambil bubuk, labu Erlenmeyer bermerk Duran sebagai alat pembuatan dan pemanasan media serta pereaksi larutan, gelas benda beserta penutupnya sebagai alat pengamatan mikroba di bawah mikroskop, cawan petri sebagai wadah kultur mikroba, pengaduk kaca sebagai alat bantu dalam homogenisasi larutan, pipet tetes sebagai alat pengambil larutan dalam satuan tetesan, tabung Durham sebagai alat penangkap gas hasil fermentasi, kompor listrik bermerk Maspion sebagai alat pemanas media, pH meter bermerk Eutech Instrument pH700 sebagai alat ukur pH dari media, colony counter bermerk Eschen Bach sebagai alat hitung koloni mikroba, spektrofotometer bermerk Spectronic tipe 20Dt sebagai alat ukur turbiditas pada sampel, waterbath bermerk Memmert sebagai alat inkubasi larutan menggunakan air, magnetic stirrer/hot plate bermerk IKAC tipe MAG HS7 sebagai alat homogenisasi larutan serta pelelehan media yang bersifat padat, timbangan semi-analitik bermerk Shimadzu sebagai alat timbang bahan atau sampel, timbangan digital bermerk ACIs tipe AD-600i sebagai alat timbangan sampel yang memiliki satuan dua desimal dibelakang koma, shaker tipe VRN-200 sebagai alat homogenisasi larutan, vortex mixer merek Thermolyne untuk homogenisasi tidak dengan kecepatan konstan, centrifuge merek PLC sebagai alat pemisah campuran berdasarkan berat jenis, lemari asam bermerk Isocide sebagai tempat untuk mereaksikan bahan yang bersifat asam/basa kuat, enkast sebagai tempat untuk menginokulasi kapang, inkubator bermerk Memmert sebagai tempat inkubasi mikroba, desikator sebagai alat penyerap uap air, oven bermerk Despatch & Shimadzu sebagai alat bantu proses pengeringan sampel, thermal cycler bermerk Bio-RAD tipe T100 sebagai alat amplifikasi DNA dan inkubasi sampel dengan microtube PCR, micro-centrifuge merek Boeco tipe M24A sebagai alat pemisah sampel
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
6
berdasarkan berat jenis, Laminar Air Flow (LAF) sebagai alat inokulasi bakteri dan khamir, electrophoresis chamber sebagai wadah sampel ketika proses elektroforesis berjalan, incubator shaker merek YC-R50 sebagai alat bantu inkubasi dengan penggojogan, anaerobic jar sebagai alat inkubasi secara anaerobik, buret sebagai alat titrasi, dispenser bermerk Jencons Digitrate sebagai alat pengambilan larutan dengan volume tertentu, mikroskop sebagai alat pengamatan mikroba, otoklaf bermerk All American tipe UGLP 38 sebagai tempat sterilisasi alat dan bahan, serta kulkas bemerk Sharp & LG sebagai tempat penyimpanan kultur, media, dan bahan-bahan kimia.
2. Bahan Dalam praktikum ini, bahan seperti akuades, protein ept, ekstrak daging, alkohol 70%, media nutrient agar, media nutrien cair, suspensi dan kultur bakteri dipergunakan.
3. Cara Kerja Langkah pertama dari pembuatan ekstrak daging adalah 500 gram daging segar digiling dan dipisahkan dari lemak, 10 gram protein ept dan 5 gram natrium klorida dicampur dengan 500 mililiter air suling, kemudian disimpan di lemari es selama 24 jam. Setelah itu campuran dipanaskan selama 20 menit hingga mendidih, kemudian disaring. Kemudian aquades ditambahkan ke filtrat yang diperoleh hingga mencapai 1000 ml, kemudian campuran diautoklaf pada suhu 121 ° C selama 20 menit. Langkah pertama dalam pembuatan Nutrien Cair yaitu ekstrak daging dan protein ditimbang masing-masing 3 gram dan 5 gram. Kemudian kedua zat tersebut dilarutkan dalam aquades hingga mencapai 1000 ml, kemudian dihomogenisasi. Setelah itu campuran dipanaskan dalam heater selama 5 menit hingga mendidih, kemudian campuran tersebut didinginkan dan pH diatur menjadi netral (pH = 7,0). Selain itu, tambahkan air suling kembali ke 1000 ml untuk menggantikan air suling evaporasi. Campuran disaring dan disterilkan dalam autoclave dengan tekanan 2 atm dan suhu 121 ° C selama 20 menit. Langkah pertama pembuatan Nutrien Agar yaitu campurkan 15-20 gram bubuk agar-agar dengan 1000 mililiter media cair. Campuran dihomogenisasi kemudian disterilkan dalam autoklaf pada 2 atmosfer pada suhu 121 ° C selama 15 menit. Tuang adonan ke dalam tabung reaksi untuk membuat media kultur, tegak dan miringkan. Sebelum menjepit, tabung untuk memiringkan media dimiringkan 30 ° terhadap bidangnya. Langkah pertama dalam isolasi Bakteri dengan Metode Spread-Plate adalah tambahkan 0,1 mL larutan sampel yang telah diencerkan secara bertahap ke dalam media
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
7
nutrisi terkompresi. Kemudian gunakan spatel Drygalski untuk mengoleskan larutan secara merata pada permukaan media agar-agar. Kemudian, tutup cangkir, beri label, dan bungkus untuk inkubasi. Setelah inkubasi, diamati pertumbuhan koloni pada media yang digunakan untuk pengamatan. Langkah pertama dalam isolasi Bakteri dengan Metode Streak-Plate adalah media nutrisi yang dipadatkan akan dibudidayakan melalui lingkaran suspensi bahan. Kemudian bahan tersebut dikikis (biasanya secara zigzag) pada permukaan media. Selama inkubasi, tutupi piring yang berisi potongan-potongan bahan, beri label, bungkus, dan balikkan. Selain itu, diamati adanya guratan pada media untuk pertumbuhan koloni. Langkah pertama dalam isolasi Bakteri dengan Metode Pour-Plate adalah tuang nutrisi cair ke dalam cawan petri steril dan dinginkan hingga 50 ° C. Gunakan lingkaran suspensi untuk menyuntikkan media, lalu tutup cangkir menggunakan teknik angka delapan dan kocok dengan baik. Kemudian piring dibungkus dan diinkubasi pada suhu kamar selama 1-2 hari. Setelah itu, koloni yang terbentuk di permukaan dan di atas agaragar diamati. Langkah pertama dalam isolasi bakteri dengan Tabung Reaksi (Agar Slant & Agar Stab) untuk lereng agar-agar yaitu nutrisi cair yang dituangkan harus sedikit miring sebelum mengeras. Setelah pengeringan, gunakan jarum cincin untuk mendistribusikan larutan sampel secara merata pada agar-agar. Kemudian, inkubasi tabung reaksi tersebut. Untuk menusuk, nutrisi cair dipadatkan di dalam tabung reaksi. Setelah proses pengeringan, jarum inokulasi dilapisi dengan sampel dan kemudian ditusuk dengan jarum. Kemudian, inkubasi tabung reaksi tersebut.
IV. Hasil dan Pembahasan 1. Hasil Berdasarkan praktikum yang telah dilakukan, diperoleh hasil sebagai berikut: Tabel 1. Klasifikasi alat gelas dan alat berat No.
Nama Alat
1.
Jarum inokulasi
Gambar
Spesifikasi
Fungsi
-
Menginokulasi mikroba pada media agar tegak
2.
Jarum ose
-
Menginokulasi bakteri dan khamir yang
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
8
bersifat aerobik 3.
Jarum enten
-
Menginokulasi kapang/ miselium kapang
4.
Mikropipet
-
Mengambil suspensi dalam satuan volume mikroliter
5.
Pipet tip
-
Alat bantu mikropipet dalam pengambilan sampel dengan ukuran mikroliter
6.
Microtube
-
Alat tampung larutan dalam volume mikroliter
No
BORANG
7.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
9
Corong
-
Alat bantu penuangan larutan ke dalam alat dengan mulut tabung yang kecil
8.
Pipet ukur
-
Mengambil larutan dalam volume tertentu
9.
Propipet
-
Alat penghisap dari pipet ukur
10.
Flakon
-
Tempat wadah suatu spesimen
11.
Tabung reaksi
Pyrex
Tempat untuk mereaksikan larutan atau sebagai media agar tegak atau miring
12.
Pinset
-
Mengambil bahan secara aseptis
13.
Gelas beker
Pyrex
Tempat menampung/ mencampur larutan
No
BORANG
14.
15.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
10
Gelas ukur
Lampu spiritus
Pyrex•Her ma
Mengukur
-
Mensterilkan
volume larutan
alat
16.
Corong
-
fermentasi
Tempat terjadinya reaksi fermentasi
17.
Labu ukur
-
Tempat mengencerkan larutan
18.
Spatel Drigalski
-
Menyebar suspensi mikroba pada metode spread-plate
19.
Spatula
-
Mengambil bahan dalam wujud bubuk
20.
Labu Erlenmeyer
Duran
Tempat pembuatan, pemanasan, atau reaksi suatu larutan
No
BORANG
21.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
11
Gelas benda &
-
penutup
Mengamati mikroba di bawah mikroskop
22.
Cawan petri
-
Tempat pembiakkan kultur mikroba
23.
Pengaduk kaca
-
Menghomogen isasi larutan
24.
Pipet tetes
-
Mengambil larutan/reagen dengan satuan tetesan
25.
Tabung Durham
-
Menangkap gas hasil fermentasi
26.
Kompor listrik
Maspion
Membantu pemanasan/ho mogenisasi atau melelehkan media
No
BORANG
27.
28.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
12
pH meter
Colony counter
Eutech
Mengukur dan
Instrument
mengatur pH
pH700
media/sampel
Eschen
Menghitung
Bach
jumlah koloni mikroba
29.
Spektrofotometer
Spectronic
Mengukur
20Dt
turbiditas sampel
30.
Waterbath
Memmert
Menginkubasi larutan dengan air
BORANG
31.
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
13
Magnetic
IKAC
Menghomogen
stirrer/hot plate
MAG HS7
isasi larutan dan melelehkan media padat
32.
Timbangan semianalitik
Shimadzu
Menimbang bahan/sampel
No
BORANG
33.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
14
Timbangan
ACIs AD-
Menimbang
digital
600i
bahan/sampel dengan ketelitian dua desimal di belakang koma
34.
Shaker
VRN-200
Membantu proses homogenisasi dengan kecepatan konstan
35.
Vortex mixer
Thermolyn
Membantu
e
proses homogenisasi dengan kecepatan tidak konstan
No
BORANG
36.
Centrifuge
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
15
PLC
Memisahkan campuran berdasarkan berat jenisnya
37.
Lemari asam
Isocide
Tempat mereaksikan bahan bersifat basa/asam kuat
38.
Enkast
-
Tempat inokulasi kapang
No
BORANG
39.
Inkubator
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
16
Memmert
Menginkubasi media
40.
Desikator
-
Menyerap uap air
41.
Oven
Despatch &
Mengeringkan
Shimadzu
sampel
No
BORANG
42.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
17
Thermal cycler
Bio-RAD
Mengamplifik
T100
asi DNA dan menginkubasi sampel PCR dengan microtube
43.
Micro-centrifuge
Boeco
Memisahkan
M24A
sampel berukuran kecil berdasarkan berat jenisnya
No
BORANG
44,
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
18
Laminar Air Flow
-
(LAF)
Menginokulasi bakteri dan khamir
45.
Electrophoresis
-
chamber
Tempat belangsungnya proses elektroforesis
46.
Incubator shaker
YC-R50
Menginkubasi dengan penggojogan
No
BORANG
47.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
19
Anaerobic jar
-
Menginkubasi secara anaerobik
48.
Buret
-
Menampung titran untuk proses titrasi
No
BORANG
49.
Dispenser
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
20
Jencons
Mengambil
Digitrate
larutan dengan volume tertentu
50.
Mikroskop
-
Membantu dalam pengamatan mikroba
No
BORANG
51.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
21
Otoklaf
All
Mensterilkan
American
alat dan bahan
UGLP 38
52.
53.
Otoklaf modern
Kulkas
Hicclave
Mensterilkan
HVE-50
alat dan bahan
Sharp &
Menyimpan
LG
kultur, media, dan bahanbahan kimia
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
22
Tabel 2. Klasifikasi jenis medium agar No.
Medium
1.
Nutrient broth
2.
Agar miring
3.
Agar tegak
Gambar
No
BORANG
4.
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
23
Agar plate
Tabel 3. Jenis-jenis teknik isolasi mikroba No.
Teknik isolasi
1.
Spread-plate
2.
Streak-plate
Gambar
BORANG
3.
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
24
Pour-plate
2. Pembahasan Dalam menciptakan lingkungan yang aman dan bersih digunakan teknik aseptik yang dirancang untuk memberikan kondisi aman dan mencegah kontaminasi (Utami et al., 2016). Kontaminasi mengacu pada masuknya kontaminan seperti bakteri, jamur dan virus ke dalam kultur yang akan dibudidayakan. Sedangkan sterilisasi merupakan upaya untuk menghilangkan kontaminan yang tidak diinginkan dalam media atau kultur sehingga tercipta kondisi steril (Yoo, 2018). Contoh alat sterilisasi berupa autoclave, prinsip kerjanya terletak pada aliran uap panas di bawah tekanan, sehingga alat yang ditempatkan di dalam alat dapat disterilkan. Biasanya settingan biasa selama 15-30 menit pada suhu 121 ° C dibawah 2 atmosfir (Cappuccino & Welsh, 2019).
Gambar 6. Skema kerja alat autoklaf (Cappuccino & Welsh, 2019)
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
25
Peralatan di laboratorium dapat dibedakan menjadi alat berat dan alat kaca. Alat berat merupakan peralatan untuk penggunaan stasioner karena sulit bergerak, seperti di dalam autoclave. Alat gelas merupakan alat yang transparan dan mudah dipindahkan bila digunakan di laboratorium. Alat-alat ini paling sering terpapar kontaminan dan oleh karena itu perlu didisinfeksi. Alat yang tidak tahan panas (seperti pipet ukur atau pipet dengan gondok yang membesar) dapat disterilkan dengan bahan kimia seperti alkohol atau etanol. Pada saat yang sama, alat tahan panas seperti gelas kimia, pipet, dan labu Erlenmeyer dapat disterilkan menggunakan alat yang memanaskan alat sterilisasi seperti autoclave atau alat sterilisasi uap Arnold (Cappuccino & Welsh, 2019). Saat membudidayakan kultur mikroba di laboratorium, Anda harus mengetahui beberapa istilah. Ketika peneliti ingin mendapatkan strain mikroba tertentu dari sampel yang tersedia, istilah isolasi digunakan. Inokulasi merupakan tahap isolasi dimana mikroorganisme ditempatkan pada media yang mendukung pertumbuhannya. Inokulum dapat diperoleh setelah kultur yang diisolasi berhasil dibudidayakan. Subkultur merupakan hasil perbanyakan inokulum yang diperoleh (Cappuccino & Welsh, 2019). Dalam praktik ini, terdapat banyak jenis metode isolasi mikroba dengan menggunakan cawan petri, antara lain pelat ekspansi, pelat coretan, dan pelat miring. Metode papan ekspansi cocok untuk pemula karena memiliki cara kerja yang sederhana. Namun, kelemahan dari metode ini adalah koloni tidak terdistribusi secara merata pada media kultur dan rentan terhadap pengaruh zat pendispersi atau kontaminan. Metode stripe plate dikembangkan untuk menggantikan titik lemah metode pelat difusi, yaitu memiliki pola dispersi koloni yang mudah diamati. Dibandingkan dengan dua metode pertama, metode tilting plate memiliki keunggulan yaitu dapat memisahkan mikroorganisme anaerob. Namun kelemahan dari kedua teknologi tersebut adalah memerlukan operasi pengikisan pada media kultur dan memerlukan homogenisasi campuran media kultur dan isolatnya, karena jika tidak maka hasil pemisahan dapat menjadi tidak valid (Cappuccino & Welsh, 2019). Selain cawan petri, agar bevel dan agar taji merupakan jenis media kultur yang lain, dimana tabung reaksi digunakan sebagai media kultur agar-agar. Kemiringan agar dibuat dengan memiringkan media cair sebelum mengeras, media dirancang untuk memanfaatkan luas permukaan lereng untuk membudidayakan kultur mikroba murni. Pada saat yang sama, duri agar digunakan untuk membudidayakan dua mikroorganisme yang bernapas lambat dan untuk memeriksa motilitas mikroorganisme yang diteliti (Cappuccino & Welsh, 2019). Ada beberapa metode pengobatan saat membudidayakan mikroorganisme. Sebelum pemisahan mikroorganisme, difusi harus dilakukan secara bertahap agar konsentrasi mikroorganisme pada sampel yang digunakan dapat dikurangi. Dengan begitu, keberadaan agen penyebar dalam kultur dapat diminimalisir, dan perhitungan mikrobiologi dapat dilakukan. Saat
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
26
menggunakan metode pelat miring untuk kultur, yang terbaik adalah mengocok sambil mencampur media dan isolat untuk mencapai homogenisasi. Saat larutan dipadatkan dengan memutar cawan petri, inkubasi dilakukan. Hal ini dilakukan untuk menghindari pengembunan uap air dari media hangat yang dapat menyebabkan kontaminasi pada kultur. Dalam analisis yang dilakukan dalam praktik ini, beberapa metode pengolahan digunakan. Gunakan proses pengenceran bertahap agar konsentrasi mikroorganisme terlarut yang ada dalam sampel dapat dikurangi, sehingga penghitungan koloni dapat dilakukan saat isolat dikultur pada medium agar dan risiko agen pendispersi dapat diminimalkan. Teknologi pelat miring bertujuan untuk mencapai homogenisasi yang baik antara media cair hangat dan strain terisolasi yang akan dibudidayakan. Setelah campuran mengental, balikkan cawan petri untuk mengerami. Hal ini dilakukan untuk mencegah uap air mengembun, karena medium yang masih panas dan kondensasi air dapat menimbulkan pencemaran.
Gambar 6. Proses dilusi bertahap pada kultur mikroba
V.
Kesimpulan
Berdasarkan praktikum yang dilaksanakan, diperoleh kesimpulan sebagai berikut: a. Alat-alat yang menunjang penelitian mikrobiologi terdiri dari alat berat dan alat gelas, serta teknik aseptis diterapkan pada alat gelas baik yang tahan terhadap suhu panas maupun yang tidak tahan terhadap suhu panas. b. Media kultur utama yang digunakan pada penelitian mikrobiologi terbagi menjadi empat, yaitu agar-plate untuk mengisolasi dan membiakkan kultur murni, nutrient broth sebagai media yang dicampur dengan isolat, serta agar miring dan agar tegak untuk menginokulasi mikroba di dalam tabung reaksi. c. Teknik isolasi yang digunakan pada praktikum ini adalah spread-plate yang sederhana dalam pelaksanaannya, streak-plate yang bertujuan untuk mendapatkan koloni murni, dan pour-plate untuk mengisolasi mikroba anaerob.
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
27
VI. Daftar Pustaka Bykowski, T., Holt, J.F., and Stevenson, B. 2019. Aseptic technique. Current Protocols Essential Laboratory Techniques, 18(31): 1-13. Cappuccino, J. G. & Welsh, C. 2019. Microbiology: A Laboratory Manual. Pearson, New Jersey, pp. 16, 13-24, 136-137, 290, 383. Istini. 2020. Pemanfaatan plastik poliproilen standing pouch sebagai salah satu kemasan sterilisasi peralatan laboratorium. Indonesian Journal of Laboratory, 2(3): 41-46. Utami, S.P., Mulyawati, E., Soebandi, D.H. 2016. Perbandingan daya antibakteri disinfektan instrument preparasi saluran akar natrium hipoklorit 5,25 %, glutaraldehid 2%, dan disinfektan berbahan dasar glutaraldehid terhadap Bacillus subtilis. Jurnal Kedokteran Gigi, 7(2): 151-156. Yoo, J.H. 2018. Review of disinfection and sterilization - back to the basics. Infect Chermother, 50(2): 101-109.
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
28
Lampiran 1. Mengenal Alat-alat Laboratorium dan Alat-alat Sterilisasi (Acara Praktikum No. 1) a. Menggunakan otoklaf
Isi air pada ruangan bawah otoklaf hingga batas angsang
Hidupkan pemanas
Siapkan alat-alat yang akan disterilisasi
Tutup otoklaf dengan rapat
Letakkan alat atau bahan diatas angsang
Bungkus pipet dan cawan petri dengan kertas sampul atau aluminium
Buka kran udara yang ada dipermukaan tutup untuk mengeluarkan udara
Atur otoklaf selama pemanasan (2 atm, 121 °C, 15-30 menit)
Hentikan pemanasan ketika terdengar bunyi peluit, lalu biarkan otoklaf mendingin
Simpan media yang masih panas pada temperatur kamar
Pindahkan dan keringkan alat dan bahan yang telah steril di dalam oven
Tunggu tekanan pada otoklaf turun sampai nol, lalu buka tutup otoklaf dengan hatihati
b. Menggunakan oven
Hidupkan oven dan atur temperatur (170-180 °C)
Bungkus alat-alat yang akan disterilisasikan
Masukkan alat-alat ke dalam oven dan letakkan diatas rakrak yang tersedia
Keluarkan alat yang sudah steril dari oven
Hentikan pemanasan dan biarkan alat mendingin
Tunggu proses sterilisasi selama 2 jam
No
BORANG
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
29
2. Pembuatan Medium Nutrien Cair (Acara Praktikum No. 13) a. Menggunakan ekstrak daging Timbang dengan teliti 3 gram ekstrak daging dan 5 gram pepton
Larutkan dalam 1000 ml akuades dan campur hingga homogen
Panaskan dalam pemanas air selama 5 menit hingga mendidih
Saring dengan kertas saring atau kain penyaring yang bersih
Tambah akuades netral hingga volume menjadi 1000 ml kembali
Dinginkan kemudian buat pH medium netral
Sterilkan dengan menggunakan autoklaf (2 atm, 121 °C, 20 menit)
b. Pembuatan ekstrak daging Timbang dengan teliti 500 gram daging segar, 10 gram pepton dan 5 gram NaCl
Bersihkan daging dari lemak dan giling daging sampai halus
Tambah 500 ml akuades, lalu aduk dan simpan dalam lemari es (24 jam)
Masukkan dalam autoklaf (121 °C, 20 menit)
Saring dan tambah akuades ke filtrat sampai volume menjadi 1000 ml
Panaskan selama 20 menit hingga mendidih
Tambahkan pepton dan NaCl ke ekstrak daging untuk membuat nutrien cair
Sterilkan medium pada 121 °C
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
30
c. Pembuatan medium nutrien agar Atur pH medium nutrien cair
Tambahkan 15-20 gram agar-agar untuk setiap 1000 ml medium cair
Aduk campuran sampai merata, lalu sterilkan dalam autoklaf (2 atm, 121 °C, 15 menit)
Letakkan medium miring dengan sudut 30° terhadap bidang datar
Isi dengan larutan medium, 10 ml untuk medium tegak dan 5 ml untuk medium miring
Sterilkan tabung reaksi 10 ml
Letakkan medium tegak pada posisi tegak
BORANG
3.
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
31
Penyetelan pH Suatu Medium Pertumbuhan (Acara Praktikum No. 14)
Siapkan 500 ml medium nutrien cair
Ambil 10 ml medium tersebut dan masukkan ke dalam tabung (buat rangkap 2)
Tambahkan 0,5 ml larutan indikator BTB 0,04% ke dalam salah satu tabung, campur hingga homogen
Bandingkan warna yang ada pada kedua tabung melalui lubang pengintai
Letakkan medium yang ditambah indikator di depan akuades dan bersilangan dengan larutan standar di dalam komparator blok
Letakkan larutan standar bersilangan dengan akuades di dalam komparator blok
Titrasi medium yang berwarna kuning dengan larutan NaOH 0,1 N hingga warna mendekati larutan standar (hijau)
Titrasi medium yang berwarna biru dengan larutan HCl 0,1 N hingga warna mendekati larutan standar (hijau)
Gunakan larutan 0,1 N NaOH atau 0,1 N HCl untuk menghitung berapa ml NaOH atau HCl yang diperlukan untuk sisa medium (490 ml)
pH medium dilihat kembali dengan memakai komparator lovibond *1000*, catat besar pH medium
Uji kembali, jika terdapat yang salah ulangi penyetelan pH seperti semula
Gunakan larutan NaOH 1N atau HCl 1N untuk penambahan basa atau asam kedalam sisa medium (490 ml)
Saring medium, lalu masukkan ke dalam tabung-tabung reaksi dan sterilkan dalam autoklaf (1 atm, 121 °C, 20 menit)
BORANG
4.
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
32
Isolasi Bakteri (Acara Praktikum No. 15) a. Cara goresan (Streak plate method) Letakkan cairan nutrien agar dalam penangas air
Dinginkan sampai temperatur ± 50 °C
Tuangkan medium agar tersebut ke dalam cawan petri steril secara aseptik, biarkan sampai dingin dan padat
Beri label pada cawan petri kemudian bungkus dan balik cawan petri
Buat goresan pada permukaan agar
Ambil 1 ose suspensi bahan yang mengandung bakteri secara aseptik
Pilih salah satu koloni dari masing-masing tipe koloni yang tumbuh pada bekas goresan
Ambil secara aseptis dengan ose satu koloni yang dikehendaki
Suspensikan dalam air steril
Inkubasikan pada temperatur yang sesuai selama 24-48 jam
Pindahkan masingmasing jenis hasil isolasi ke dalam medium nutrien agar miring
Periksa dengan pengecatan Gram
Uji kembali kemurniannya dengan pengecatan Gram
BORANG
No
FO-UGM-BI-07-13
Berlaku sejak 19 Maret 2021
LAPORAN PRAKTIKUM MIKROBIOLOGI
Revisi
0
LABORATORIUM MIKROBIOLOGI
Halaman
33
b. Cara taburan (Pour plate method) Suspensikan bahan yang mengandung bakteri atau campuran seencer mungkin
Cairkan medium dalam penangas air (100 °C), dinginkan sampai temperatur 50 °C
Inokulasikan dengan satu ose suspensi secara aseptis, lalu gojog hingga tercampur rata
Amati bentuk koloni bakteri baik yang tumbuh di permukaan dan di dalam agar
Bungkus cawan-cawan petri tersebut, lalu inkubasikan pada temperatur kamar selama 24-48 jam
Tuangkan ke dalam cawan petri steril berlabel secara aseptis dan ratakan
Perhatikan koloni yang tumbuh pada media baik yang ada di permukaan, tengah dan dasar medium
Catat semua koloni berdasarkan warna, bentuk, ukuran dan konsistensi koloni
